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目的研究多梳蛋白2(PCL2)基因与胶质瘤增殖、凋亡等特性的关系,探讨PCL2在胶质瘤发生发展中的作用和可能机制。方法1.利用癌症基因组图谱(TCGA)数据库检测多种肿瘤中PCL2的表达情况,收集临床胶质瘤(WHOⅠ——Ⅳ级)病例117例,免疫组化染色检测PCL2表达和定位。2.构建过表达PCL2基因和干扰PCL2基因的腺病毒载体,分别转染进入人胶质瘤U87细胞系和U251细胞系,Western blot实验检测PCL2蛋白表达水平;3.倒置显微镜观察细胞内转染PCL2后的形态变化;CCK8实验绘制细胞生长曲线、EdU增殖检测法确定细胞增殖能力、平板克隆形成实验检测肿瘤细胞集落形成能力、流式细胞仪检测细胞的周期和凋亡;用Western blot方法检测过表达PCL2和干扰PCL2条件下的PRC2复合物核心蛋白EZH2、SUZ12和EED的表达情况以及H3K27me3、H3K9me2、H3K4me2甲基化水平。4.使用EZH2的抑制剂——s-腺苷-同型半胱氨酸水解酶抑制剂(DZNep)干预过表达PCL2基因的U87细胞,检测瘤细胞增殖、集落形成能力以及PRC2核心蛋白EZH2、SUZ12和EED的表达水平。结果1.TCGA数据库中PCL2基因在31种肿瘤中表达不同:弥漫性大B细胞淋巴瘤(BLCA)、食管癌(ESCA)及胶质母细胞瘤(GBM)等高表达;急性髓细胞样白血病(LAML)、卵巢浆液性囊腺瘤(OV)及肺癌(LUAD和LUSC)等表达低于相应正常组织。117例人胶质瘤组织免疫组化检测发现PCL2阳性表达于细胞核,其表达量随胶质瘤级别的增加而增加(P<0.05)。2.过表达PCL2组(hPCL2组)和干扰PCL2组(shRNA PCL2组)的腺病毒载体构建成功,GFP荧光显示病毒感染效率高,PCL2基因在细胞内蛋白水平检测显示:hPCL2组和shRNA PCL2组蛋白表达趋势稳定(MOI=50:1),后续实验中感染时间均为48 h 3.倒置显微镜观察、CCK8实验、EdU细胞增殖检测、平板克隆形成实验显示:与空白对照组(NC)和空载体组(Vector)相比,过表达PCL2组(hPCL2组)细胞易聚团生长,细胞活性、增殖能力、集落形成能力增强(P<0.05,P<0.01),干扰PCL2组(shRNA PCL2组)细胞活性、增殖能力、集落形成能力降低(P<0.05,P<0.01);细胞周期检测显示hPCL2组细胞的S期占比增加(P<0.05),而shRNA PCL2组细胞的S期占比相对减少,G0/G1期占比增加(P<0.05);细胞凋亡荧光染色显示,hPCL2组细胞形态规则、较饱满,shRNA PCL2组细胞膜皱缩、胞核红染,呈现凋亡细胞的形态;细胞流式仪分析凋亡细胞比率得出,与NC组和Vector组相比较,hPCL2组的凋亡细胞占比减少(P<0.05),shRNA PCL2组的凋亡细胞比率显著增加(P<0.01)。4.Western Blot检测PRC2成员蛋白水平及组蛋白甲基化的表达情况:与NC组和Vector组相比,hPCL2组EZH2和EED表达增加(P<0.05),SUZ12表达减少(P<0.05),H3K4me2和H3K27me3的水平增加,H3K9me2的水平降低(P<0.05);与之相反,shRNA PCL2组的EZH2、SUZ12和EED的表达均减少(P<0.05),H3K4me2和H3K27me3的水平降低,H3K9me2的水平增加。5.DZNeP干预hPCL2组的U87细胞,CCK8实验显示DZNeP干预后hPCL2组(DZ-hPCL2组)细胞活性下降(P<0.05),集落形成能力也降低(P<0.05);Western Blot检测发现,与空白对照组(NC)和阴性对照组(DMSO)相比,DZ-hPCL2组EZH2、SUZ12和EED的表达均呈下降趋势(P<0.05)。结论1.PCL2基因在胶质瘤中高表达。2.过表达PCL2基因能够促进胶质瘤细胞增殖,上调PRC2核心蛋白EZH2和EED的表达,促进组蛋白H3K27me3甲基化、抑制H3K9me2和H3K4me2甲基化。3.干扰PCL2基因促进胶质瘤细胞凋亡,下调EZH2和EED的表达,抑制组蛋白H3K27me3甲基化、促进H3K9me2和H3K4me2甲基化。4.DZNeP能够通过抑制EZH2,相应降低SUZ12和EED的蛋白表达,减弱由于PCL2基因过表达所引起的胶质瘤细胞增殖。