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1999年和2002年从河北、黑龙江疑似新城疫鸡的病料中经鸡胚分离到4株病毒，分别命名为HeB-4-99、HeB-5-99、HeB-6-02和HLJ-10-02，各毒株均在48～72 h致鸡胚死亡。死亡鸡胚的尿囊液有血凝活性，并且可被NDV标准阳性血清所抑制。复归鸡试验可见发病鸡出现典型新城疫症状和病理变化，而且可以分离出病毒，鉴定分离毒株为新城疫病毒。经致病性指数（ICPI、MDT）测定结果表明，分离株为新城疫强毒株。对F基因部分片段克隆及核苷酸序列测定结果表明，4个毒株F蛋白的裂解位点氨基酸组成为112RRQKRF117，具有强毒株裂解位点氨基酸组成特点，与ICPI和MDT测定结果相吻合；核苷酸序列同源性分析显示，4株分离毒株核苷酸序列具有95.9％～100％的同源性，与La Sota的核苷酸序列同源性为81.0％～81.8％，与F48E9的核苷酸序列同源性达85.8％～89.3％。选择起始密码子开始的1-374bp核苷酸序列，对本试验的4个毒株和国内现已克隆测序的NDV毒株以及国外部分毒株共73株绘制基因系统发育进化树，结果表明HeB-4-99，HeB-5-99、HeB-6-02和HLJ-10-02归属于基因Ⅶ型。采用分离的基因Ⅶ型的NDV毒株与La Sota株制成复合灭活疫苗，并分别以La Sota株灭活疫苗、复合灭活疫苗以及复合灭活疫苗与La Sota株活疫苗联合免疫试验鸡，进行免疫保护力比较试验。结果表明，各组免疫鸡强毒攻击后均能获得保护，但在测定免疫鸡HI抗体时，发现复合灭活疫苗免疫组的抗体效价高于La Sota株灭活苗组，可能预示着复合灭活疫苗将提供更高的免疫保护力。本研究分离了四株国内流行的代表性新城疫病毒，研究了分离毒株的生物学特性，并且扩增了F基因的片段，分析分离毒株的分子特征，绘制进化树，并且制备分离毒株的复合灭活疫苗，研究了疫苗的保护效果。本研究为新城疫的防制奠定基础。