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研究目的探究甲状腺功能正常甲状腺自身抗体阳性(ATA~+)患者不同时间点(取卵日、移植第5天、移植第14天)外周血中CD4~+T细胞(Th1细胞、Th2细胞、Th17细胞和Treg细胞)及其相应的细胞因子(IFN-γ、IL-4、IL-17A和TGF-β1)和特征性转录因子(T-betmRNA、GATA-3mRNA、RORγtmRNA和FoxP3mRNA)的表达及其对体外受精-胚胎移植(IVF-ET)治疗结局的影响,进一步探究ATA对IVF-ET治疗产生不良结局的免疫学机制。研究方法1.第一部分回顾性分析ATA~+患者对体外受精-胚胎移植及冻融胚胎移植妊娠结局的影响。2.第二部分前瞻性的选取2016年06月至2016年09月在青岛大学附属烟台毓璜顶医院生殖医学科就诊接受新鲜周期IVF治疗甲状腺功能正常的患者共80例(80个周期),其中行胚胎移植的ATA~+患者28例(28个周期),甲状腺自身抗体阴性(ATA~-)患者32例(32个周期)。3.取卵日、移植第5天、移植第14天抽取甲状腺功能正常ATA~+患者和ATA~-患者的外周血。4.采用流式细胞术(FCM)检测两组患者取卵日、移植第5天、移植第14天外周血中CD4~+T细胞即Th1细胞、Th2细胞、Th17细胞和Treg细胞的比例。5.采用酶联免疫吸附法(ELISA)检测两组患者取卵日、移植第5天、移植第14天外周血中CD4~+T细胞相应的细胞因子IFN-γ、IL-4、IL-17A和TGF-β1的浓度。6.采用逆转录多聚酶链反应(RT-PCR)检测两组患者取卵日、移植第5天、移植第14天外周血中CD4~+T细胞特征性的转录因子T-betmRNA、GATA-3mRNA、RORγtmRNA和FoxP3mRNA的表达量。7.研究两组患者取卵日、移植第5天、移植第14天外周血中Th1细胞、Th2细胞、Th17细胞和Treg细胞的比例及其相应的细胞因子IFN-γ、IL-4、IL-17A和TGF-β1的浓度、特征性转录因子T-betmRNA、GATA-3mRNA、RORγtmRNA和FoxP3mRNA的表达量以及其对IVF-ET治疗结局的影响。8.研究两组患者取卵日、移植第5天、移植第14天外周血中Th1/Th2和Th17/Treg比值及其相应的细胞因子IFN-γ/IL-4和IL-17A/TGF-β1比值、特征性转录因子T-betmRNA/GATA-3mRNA和RORγtmRNA/FoxP3mRNA比值以及其对IVF-ET治疗结局的影响。9.分别对ATA~+组患者和ATA~-组患者不同时间点外周血中CD4~+T细胞及其相应的细胞因子和特征性转录因子含量的变化以及其对IVF-ET治疗结局的影响进行研究。结果1.第一部分回顾性的研究显示IVF中ATA~+患者TG-Ab和TPO-Ab的滴度明显增高,IVF优胚率、IVF移植优胚数、ICSI优胚数、ICSI移植胚胎数均明显降低(P<0.05)。ATA~+患者TG-Ab和TPO-Ab的滴度与IVF受精率呈负相关性。在FET中ATA~+患者早期流产率明显增高(P<0.05)。2.第二部分前瞻性的研究显示IVF-ET的患者超促排卵中HCG日大卵泡数、获卵数、移植优胚数的比较,在ATA~+组显著少于ATA~-组(P<0.05)。两组患者妊娠结局的比较显示生化妊娠流产率在ATA~+组明显高于ATA~-组(P<0.05)。ATA~+患者中妊娠组的优胚数、优胚率、囊胚率、移植优胚数明显多于非妊娠组(P<0.05)。3.两组患者外周血中CD4~+T细胞所占比例的研究,结果显示取卵日外周血中Th1细胞的比例在ATA~+组明显高于ATA~-组;移植第14天外周血中Th2细胞的比例在ATA~+组显著低于ATA~-组;ATA~+患者在不同时间点外周血中Th17细胞的比例均明显增高,而Treg细胞的比例均明显降低(P<0.05)。ATA~+患者中妊娠组Th17细胞的比例在不同时间点外周血中均显著低于非妊娠组(P<0.05)。4.两组患者Th1和Th2细胞、Th17和Treg细胞之间平衡关系的研究,结果显示ATA~+患者不同时间点外周血中Th1/Th2和Th17/Treg比值均显著增高(P<0.05),不同时间点外周血中Th1和Th2细胞、Th17和Treg细胞之间的平衡均被打破。ATA~+患者中妊娠组Th17/Treg比值在不同时间点外周血中均明显低于非妊娠组(P<0.05)。5.分别对ATA~+组患者和ATA~-组患者不同时间点外周血中CD4~+T细胞比例的变化进行研究,结果显示ATA~+组患者Th1细胞在移植第5天外周血中的比例明显高于移植第14天外周血中的比例(P<0.05),而ATA~-组患者Th1细胞在移植第5天外周血中的比例高于移植第14天外周血中的比例(P>0.05)。6.两组患者外周血中CD4~+T细胞相应的细胞因子浓度的研究,结果显示取卵日外周血中IFN-γ的浓度在ATA~+组明显高于ATA~-组;移植第14天外周血中IL-4的浓度在ATA~+组显著低于ATA~-组;ATA~+患者在不同时间点外周血中IL-17A的浓度均明显增高,而TGF-β1的浓度均明显降低(P<0.05)。ATA~+患者中妊娠组IL-17A的浓度在不同时间点外周血中均显著低于非妊娠组(P<0.05)。7.两组患者外周血中CD4~+T细胞相应的细胞因子比值的研究,结果显示ATA~+患者不同时间点外周血中IFN-γ/IL-4和IL-17A/TGF-β1比值均明显增高(P<0.05)。ATA~+患者中妊娠组IL-17A/TGF-β1比值在不同时间点外周血中均明显低于非妊娠组(P<0.05)。8.分别对ATA~+组患者和ATA~-组患者不同时间点外周血中CD4~+T细胞相应的细胞因子浓度的变化进行研究,ATA~+组患者取卵日外周血中IFN-γ的浓度高于移植第5天外周血中的浓度(P>0.05),而ATA~-组患者取卵日外周血中IFN-γ的浓度明显低于移植第5天外周血中的浓度(P<0.05)。ATA~+组患者移植第14天外周血中IL-4的浓度高于移植第5天外周血中的浓度(P>0.05),而ATA~-组患者移植第14天外周血中IL-4的浓度显著高于移植第5天外周血中的浓度(P<0.05)。9.两组患者外周血中CD4~+T细胞相应的特征性转录因子表达量的研究,取卵日外周血中T-betmRNA的表达量在ATA~+组明显高于ATA~-组;移植第14天外周血中GATA-3mRNA的表达量在ATA~+组显著低于ATA~-组;ATA~+患者在不同时间点外周血中RORγtmRNA的表达量均明显增高,而FoxP3mRNA的表达量均明显降低(P<0.05)。ATA~+患者中妊娠组RORγtmRNA的表达量在不同时间点外周血中均显著低于非妊娠组(P<0.05)。10.两组患者外周血中CD4~+T细胞相应的特征性转录因子比值的研究,结果显示ATA~+患者不同时间点外周血中T-betmRNA/GATA-3mRNA和RORγtmRNA/FoxP3mRNA比值均显著增高(P<0.05)。ATA~+患者中妊娠组RORγtmRNA/FoxP3mRNA比值在不同时间点外周血中均明显低于非妊娠组(P<0.05)。11.分别对ATA~+组患者和ATA~-组患者不同时间点外周血中CD4~+T细胞相应的特征性转录因子表达量的变化进行研究,ATA~+组患者移植第14天外周血中T-betmRNA的表达量明显高于取卵日外周血中的表达量(P<0.05),而ATA~-组患者移植第14天外周血中T-betmRNA的表达量低于取卵日外周血中的表达量(P>0.05)。ATA~+组患者移植第14天外周血中RORγtmRNA的表达量明显高于取卵日外周血中的表达量(P<0.05),而ATA~-组患者移植第14天外周血中RORγtmRNA的表达量高于取卵日外周血中的表达量(P>0.05)。结论1.ATA~+患者取卵日外周血中Th1细胞及其相应的细胞因子IFN-γ和转录因子T-betmRNA的含量均显著增高,可能是导致IVF-ET中获卵数少、优胚数少的原因之一。2.ATA~+患者移植第14天外周血中Th2细胞及其相应的细胞因子IL-4和转录因子GATA-3mRNA的含量均明显降低,可能是导致IVF-ET中生化妊娠流产率增高的原因之一。3.ATA~+患者不同时间点外周血中Th17细胞及其相应的细胞因子IL-17A和转录因子RORγtmRNA的含量均显著增高;而Treg细胞及其相应的细胞因子TGF-β1和转录因子FoxP3mRNA的含量均明显降低,可能是导致IVF-ET不良治疗结局的原因之一。4.ATA~+患者不同时间点外周血中Th1/Th2和Th17/Treg比值均明显增高,即Th1和Th2细胞、Th17和Treg细胞之间的平衡均被打破,可能是ATA~+患者导致IVF-ET治疗不良妊娠结局的免疫学机制之一。