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三羟基异黄酮(Genistein)是一种植物雌激素,具有广泛的生理活性及药理作用,如:具有抗氧化、抗肿瘤、雌激素样、保护心血管系统及改善骨质疏松症作用等。但三羟基异黄酮难溶于水,在体内生物利用度低,极大地影响三羟基异黄酮在体内发挥良好的生物活性。本文用去溶剂化-化学交联法制备三羟基异黄酮白蛋白纳米体(Gen-BSA-NP),以包封率及载药量为主要评价指标,用正交试验优化其制备工艺。最佳制备工艺为:牛血清白蛋白50 mg,大豆三羟基异黄酮6 mg,无水乙醇20 m L,0.25%的戊二醛150μL,室温下固化12 h。制得的Gen-BSA-NP包封率为(70.10±1.13)%,载药量为(11.36±0.17)%。通过透射电子显微镜(Transmission Electron Microscope,TEM)和Zeta电位对纳米体进行结构表征以及形态分析。结果表明,三羟基异黄酮能被白蛋白包埋形成外形规整的圆球,在水中分散性较好,Z-Average为(75.17±3.13)nm,多指数分散系数(polydispersity index,PDI)为(0.201±0.021),Zeta Potential为(-35.43±0.29)mV。结合Z-Average、PDI、Zeta Potential和电镜图可初步说明所制备的纳米混悬液稳定性良好。用傅立叶红外光谱(FTIR)、X射线衍射(XRD)和示差扫描量热仪(DSC)对Gen-BSA-NP进行了结构表征分析,推断出Gen-BSA-NP中包埋有三羟基异黄酮,且三羟基异黄酮是以无定形的形式存在的。对Gen-BSA-NP的稳定性及体外释放性进行了分析,稳定性研究表明:纳米体在37℃及以下稳定性良好,高温(100℃)及酸性条件下不稳定,在pH为7.4条件下最稳定,冷冻干燥对纳米体的稳定性没有影响,贮藏试验表明纳米体在4℃条件下贮藏最稳定。体外释放试验表明:纳米体在人工模拟的肠液中得到缓慢释放,具有很好的缓释效果。Caco-2细胞毒性试验表明,BSA对细胞活性无影响;Gen单体及Gen-BSA-NP对Caco-2细胞的抑制均表现出一定的浓度依赖性,但随浓度达到一定程度后,Gen-BSA-NP对细胞生长的抑制能力明显优于Gen单体。Caco-2细胞摄入实验结果表明Gen单体及Gen-BSA-NP均能被Caco-2细胞摄入,且Gen-BSA-NP较Gen单体更易被Caco-2细胞摄入。Caco-2细胞吸收实验结果表明,Gen-BSA-NP中的Gen变化速率要高于Gen单体,时间依赖性更强。加样小孔两侧的Papp的差异证明了三羟基异黄酮在跨膜转运的过程中发生了代谢与转化。Gen-BSA-NP相比Gen单体,更易被Caco-2细胞吸收。