目的随着肿瘤早期诊断及放化疗技术的提高,肿瘤患者治疗后长期生存率明显提高,但是放化疗对于生殖腺的不可逆损伤,使得很多育龄期女性癌症患者丧失了生殖内分泌功能,这很大程度上影响了其生活质量,尤其是对其生育后代的影响。现有的保护生殖功能的方法主要是依靠卵巢冷冻自体移植技术及化疗同时促性腺激素释放激素类似物的应用。自1994年以来,有一些病例报道化疗病人在接受骨髓移植后卵巢功能有所恢复。2005年有报道称骨髓移植细胞在受体小鼠卵巢内生成新的卵母细胞。这些发现为卵巢功能的保存和重建提出了新的可能的方法。本文旨在通过观察卵巢子宫大体及卵巢组织学变化等方式,研究骨髓移植对化疗损伤的小鼠卵巢功能的修复作用,以探索修复卵巢功能损伤的新的途径。方法1骨髓细胞的移植48只6周龄雌性SPF级昆明鼠随机分为3组。A组：正常对照组。B组：化疗并骨髓移植组,每天给予环磷酰胺150mg/kg腹腔注射,连续3天,一周后给予骨髓细胞移植2次。C组：化疗组,每天给予环磷酰胺150mg/kg腹腔注射,连续3天。自给药日开始每日上午九时,观察小鼠,称量体重,做阴道细胞涂片,通过观察阴道脱落细胞周期性变化来辅助判断卵巢功能。给药一周后,6周龄雌性昆明小鼠,25-27g,作为供体,取其胫骨股骨骨髓细胞,调整密度至1.2×108个/ml。将B组小鼠作为受体小鼠,对其进行骨髓移植,经尾静脉将骨髓细胞注射入受体鼠体内,每只小鼠约0.5ml。隔周再一次。给药起第21天、50天随机处死每组小鼠8只,取其双侧卵巢、子宫,称量卵巢、子宫湿重,做卵巢组织切片,HE染色观察卵巢组织学变化。2骨髓细胞的荧光标记与移植5只6周龄雌性昆明鼠作为受体鼠,按上述化疗方法给药后一周,经尾静脉移植入荧光标记的骨髓细胞。骨髓细胞的获取,如前所述,标记物采用Hoechest33342荧光染料,骨髓细胞密度为1.2×108个/ml,经尾静脉注射入受体鼠体内,每只小鼠约0.5ml。48小时后,颈椎脱臼处死小鼠,取其双侧卵巢,做快速冰冻病理切片,在荧光显微镜下观察,确认荧光后进行HE染色。结果1一般状态观察及动情周期的改变小鼠于给药初发生一次动情期后一段时间内持续处于动情间期,30天后部分小鼠动情周期慢慢开始恢复。至给药第21天,B、C组动情周期规律的小鼠数目、小鼠发生动情期的天数明显低于A组,但两组之间无差别。至给药第50天,B、C组动情周期规律的小鼠数目、小鼠发生动情期的天数增多,但仍低于A组,B组小鼠总动情期天数及其比率大于C组,其差别均具有统计学意义(P<0.05)。2卵巢、子宫组织学改变给药起第21天B、C组小鼠卵巢重量、子宫重量及卵巢系数均明显小于A组(P<0.05),B组小鼠的卵巢重量及卵巢系数大于C组(P<0.05)；给药起第50天,B组小鼠子宫重量、卵巢系数及C组小鼠的卵巢重量、子宫重量、卵巢系数均小于A组(P<0.05),B组小鼠卵巢系数大于C组(P<0.05)。给药起第21天、第50天,A组小鼠卵巢组织学观察均可以看到大量原始卵泡和各级发育中的卵泡,颗粒细胞层次多,卵泡液含量多,黄体发育好,体积大,黄体细胞丰富；B组和C组小鼠卵巢内原始卵泡数目显著减少,其他各级卵泡也明显减少,与A组比较具有统计学意义(P<0.05)；B组和C组小鼠卵巢内其部分组织被纤维组织所代替,黄体数量少,卵泡颗粒细胞层减少,3供体细胞示踪Hoechest33342标记骨髓细胞20min后,在荧光显微镜下观察,细胞呈现蓝色荧光。经尾静脉注入受体小鼠体内48小时后,取小鼠双侧卵巢,做冰冻病理切片,在荧光显微镜下观察,发现了显示蓝色荧光的细胞,此细胞来源于供体小鼠,细胞呈圆形,明显大于周围的细胞,周边有一圈细胞包绕。结论小鼠骨髓移植对化疗药物损伤的卵巢具有一定的修复作用。但是这种修复作用是微弱的,其机制是复杂的,目前尚不明确,其长期效果也有待于继续观察。在受体小鼠卵巢内发现来自于供体小鼠的形似卵泡结构的细胞,将为未来癌症患者甚至是卵巢早衰的患者生殖内分泌功能的重建带来新的希望。而骨髓移植要作为临床治疗卵巢功能损伤的一种手段,还需要进一步的研究。