布鲁氏菌病(Brucellosis)(简称布病)是由布鲁氏菌(Brucella．spp)引起的人、畜共患传染病。世界上有170多个国家和地区有人、畜布病存在和流行。在我国布病已波及28个省市区，并且近年呈死灰复燃，给畜牧业和人类的健康带来严重危害，因此防控布鲁氏菌病形势相当严峻。布鲁氏菌属包括新发现的海洋哺乳动物种在内，有7种21个生物型，感染人的主要有牛、羊、猪三种。布鲁氏菌是革兰氏阴性菌，兼性寄生于巨噬细胞内，从而逃避宿主的免疫清除，它主要引起人的波状热和慢性感染，造成反刍动物不育和流产等，同时它又是一种潜在的生物战剂和生物恐怖剂。控制布鲁氏菌病传播关键是进行疫苗接种，目前在一些国家使用的弱毒疫苗(牛型19号疫苗以及羊Rev.1弱毒苗)对预防布鲁氏菌病能够起到一定的作用，但弱毒疫苗接种与感染难以鉴别以及存在潜在安全性的问题，因此研制新一代布鲁氏菌病疫苗成为生命科学的重要课题。当前布鲁氏菌新型疫苗的研究主要集中在毒力相关基因缺失的突变株疫苗和重组亚单位疫苗两个领域。突变株疫苗虽然有较好的保护性，但安全性和稳定性仍需进一步的评价，并且可能有毒力返强的现象。布鲁氏菌重组亚单位疫苗能产生一定的免疫原性和免疫保护性，但保护效果不完全。于是我们认为，采用多价保护性抗原分子和利用不同的抗原提呈系统开展的布鲁氏菌重组亚单位疫苗的研究，可能为新型布鲁氏菌疫苗提供一条可行途径。本研究首先从布鲁氏菌M16中克隆L7／L12和BLS基因，并进一步用重叠延伸PCR扩增BLS-L7／L12基因，分别构建在pET32a表达载体上，转化大肠杆菌BL21，经诱导表达、纯化相应重组蛋白，铝盐吸附制备L7／L12、BLS和BLS-L7／L12重组蛋白疫苗；同时将3种蛋白抗原基因克隆到真核表达载体pVAX1上，转染COS-7细胞后证明有目的蛋白表达，大提质粒制备L7／L12、BLS和BLS-L7／L12 DNA疫苗；并利用依赖asd基因的宿主-载体平衡致死系统，把BLS-L7／L12基因转化入减毒沙门氏菌，构建以减毒沙门氏菌为载体的BLS-L7／L12蛋白疫苗和基因疫苗。随后将候选的BLS-L7／L12蛋白疫苗、DNA疫苗和减毒沙门氏菌为载体的蛋白疫苗和基因疫苗疫苗分别免疫Balb／c小鼠，三免后ELISA测定结果显示，各实验组均能诱导产生特异性抗体；抗体亚型分类实验表明重组蛋白疫苗诱导产生Th2型为主的免疫应答，DNA疫苗及以减毒沙门氏菌为载体的疫苗产生Th1型为主的免疫应答；MTT法测定免疫Balb／c小鼠T淋巴细胞增殖发现DNA组及以减毒沙门氏菌为载体的疫苗组脾脏T淋巴细胞增殖反应增强，而重组蛋白疫苗组却无显著变化；FCM测定疫苗免疫Balb／c小鼠淋巴细胞亚群分类，CD4~+／CD8~+DNA疫苗组及减毒沙门氏菌组减少，而重组蛋白组有升高趋势；ELISPOT检测特异性活化的可分泌IFN-γ的CD8~+T细胞数，DNA免疫组的斑点数显著多于对照组。牛种布鲁氏菌544A强毒株对免疫Balb／c小鼠攻毒实验证明我们所构建的疫苗都具有一定的免疫保护性，DNA疫苗好于蛋白疫苗，双价疫苗好于单价，以减毒沙门氏菌活载体双价基因疫苗略好于DNA疫苗，但保护性不完全。以上研究为布鲁氏菌病疫苗的深入研究奠定了基础。