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研究背景与目的:近年来,随着经济社会的快速发展,环境污染逐渐加重,雌激素及环境雌激素对人类健康的影响日益受到重视。雌激素及环境雌激素对性激素敏感性恶性肿瘤的影响成为研究热点,但有关雌激素及环境雌激素和儿童肿瘤相关性的报道还很少。肝母细胞瘤是儿童最常见的恶性肝脏肿瘤,其病因不明,孕前或孕期中父母及儿童早期的环境暴露因素日益受到关注。本实验拟以雌二醇及双酚A为干预物质,观察其对人肝母细胞瘤HepG2细胞体外增殖的影响,检测细胞周期、细胞凋亡和端粒酶活性,研究雌激素及环境雌激素对肝母细胞瘤细胞增殖的影响,并探讨可能的作用机制,为儿童实体肿瘤的预防、治疗和强化环境保护措施的制定提供实验依据。材料与方法:(一)实验分组:HepG2细胞体外经常规培养扩增后分为6组:组1,无干预(对照组);组2,加双酚A(BPA);组3,加17β一雌二醇(E2);组4,加ICI182,780(ICI);组5,同时加BPA和ICI;组6,同时加E2和ICI。(二)HepG2细胞光吸收度值(AV)的测定:HepG2细胞体外培养及分组同前。CCK-8法使用酶标仪分别在0、24、48、72、96、120h检测450nm细胞光吸收度值,绘制生长曲线。(三)HepG2细胞细胞周期及细胞凋亡指数(AI)检测:HepG2细胞体外培养及分组同上,48h用流式细胞仪检测细胞周期分布及细胞凋亡指数(AI)。(四)HepG2细胞端粒酶活性的测定:HepG2细胞体外培养及分组与前相同,分别在24、48、72h用实时荧光定量PCR法检测各组细胞的端粒酶活性。结果:(一)HepG2细胞光吸收度值(AV)的测定:48h时组1、组2、组3、组4、组5和组6分别为0.46±0.03,0.66±0.02,0.70±0.01,0.43±0.00,0.79±0.01和0.81±0.04,组1与组2或组3比较,均具有明显的统计学差异(p<0.01),组4与组5或组6比较,均具有明显的统计学差异(p<0.01)。96h组1、组2、组3、组4、组5和组6分别为0.70±0.15,1.52±0.15,1.31±0.25,0.76±0.12,2.03±0.30和1.72±0.26,组1与组2比较具有统计学差异(p<0.05),组4与组5或组6比较均具有明显的统计学差异(p<0.01)。24h、96h和120h组1与组4、组2与组5、组3与组6比较均无统计学差异(p>0.05)。(二)HepG2细胞细胞周期及细胞凋亡指数(AI)的测定:48h时各组比较细胞周期分布无明显差异(p>0.05)。检测凋亡指数显示组1、组2、组3、组4、组5和组6的AI分别为12.99±0.58%、5.72±1.86%,6.81±1.63%,12.39±1.05%,6.67±0.76%和6.39±1.56%;组1与组2或组3比较有明显统计学差异(p<0.01),组4与组5或组6比较有明显统计学差异(p<0.01),组1与组4、组2与组5、组3与组6比较均无统计学意义(p>0.05)。(三)HepG2细胞端粒酶活性的测定:48h时组2和组3的端粒酶活性分别是组1的3.2倍和3.5倍(p<0.01),组5及组6的端粒酶活性分别是组4的2.3倍和3.3倍(p<0.01)。72h时组2和组3的端粒酶活性分别是组1的3.2倍和3.0倍(p<0.01),组5和组6的端粒酶活性分别是组4的2.8倍和2.9倍(p<0.01)。24h、48h和72h时,组1与组4、组2与组5、组3与组6比较均无统计学差异(p>0.05)。端粒酶活性变化曲线提示,24h、48h和72h时组1及组4的端粒酶活性变化不大,48h较24h有所下降,72h较48h又有所上升;余组48h端粒酶活性较24h明显增高,72h较48h增速放缓。结论:1.E2和BPA可促进人肝母细胞瘤HepG2细胞的体外增殖。2.E2和BPA促HepG2细胞增殖的效应与细胞凋亡抑制有关。3.E2和BPA可以增强HepG2细胞的端粒酶活性,这可能是HepG2细胞凋亡受抑制的原因。4.雌激素受体拮抗剂ICI不能消除E2和BPA的促HepG2细胞增殖的效应,提示该促增殖效应的发挥与非雌激素受体依赖途径有关。