微透析技术在植物活体取样中的应用研究

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本文将微透析技术引入植物活体取样,对微透析技术在植物活体取样中的应用进行了研究。研究结果如下:1.探讨了植物微透析取样前后探针体外回收率的变化情况。将盆栽吴屯杨作为取样对象,以植物激素为检测物,利用高效液相色谱仪进行测定。在每次微透析取样前、后测定微透析探针的体外回收率,研究结果表明:微透析技术在植物体上取样进行定量测定是可行的;探针在最初使用时回收率相对偏低,接下来回收率会升高并达到最大值,然后逐渐下降;探针在植物活体上取样可重复多次使用,且每次探针的体外回收率都各不相同,因此,在进行定量测定时,每次取样都须进行探针回收率的测定,以此来修正样品中待测物质的测定值。2.研究了微透析探针在测定植物激素时体外回收率的影响因素,结果显示:低的灌流速度下,探针有较高的回收率;灌流速度一定时,探针外激素浓度的变化对探针回收率的影响较小,几乎可以忽略不计;即使是同一型号的探针,不同探针之间回收率仍有显著差异,因此不能用一支探针的回收率去推断另一支的回收率;在一定的取样时间内,探针的回收率没有显著变化,表明本试验所用探针稳定性良好;温度的变化对探针回收率有较大影响,较高的温度有利于提高探针的回收率。3.以鹅掌柴及吴屯杨为材料,采用微透析-高效液相色谱联用的方法提取并测定内源激素样品。在微透析探针插入植株嫩茎后的不同时间段分别收集透析液。HPLC色谱条件:Inertsil ODS-SP色谱柱,V(甲醇):V(水,0.2%磷酸)=60:40为流动相,0.6mL/min的流速,柱温为30℃,检测波长:赤霉素,203nm;细胞分裂素,273nm;生长素,214nm;脱落酸,263nm。透析液样品在确定的色谱条件下直接进样,较好地分离测定出植株嫩茎中及其质外体内赤霉素、细胞分裂素、吲哚乙酸、脱落酸的含量。初步研究了盐胁迫下吴屯杨体内激素含量的变化,结果显示经过盐处理的吴屯杨植株体内脱落酸含量有明显的增加。通过该方法测定植物激素其加标回收率可达90%以上,保留时间精密度在0.013%-0.105%之间,线性相关系数(r)大于0.999,实现了植物内源激素实时、活体、在线的测定。
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