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研究背景与目的膀胱癌（Bladder cancer,BC）是泌尿系统最常见的恶性肿瘤之一,其发病率有逐年上升的趋势。目前的研究认为膀胱癌的发生、发展与环境及表观遗传等多方面的因素有关,其中的病理生理学机制尚未完全明确。对膀胱癌发生、发展机制的深入探索,有利于推动膀胱癌诊断技术、治疗方案、长期监测等方面的进展,从而改善膀胱癌患者的预后。长链非编码RNA（long non-coding RNA,lnc RNA）是长度超过200个核苷酸,一般不编码蛋白质的分子。随着近年来测序技术的不断进步以及研究的不断深入,研究人员发现lnc RNA分子的表达水平异常可能与正常细胞的癌变、癌细胞的增殖、进展、耐药等密切相关。本课题组前期通过高通量测序筛选出在膀胱癌组织中显著下调的lnc RNA STYK1-2,MTS实验及Transwell实验发现抑制lnc-STYK1-2的表达可促进膀胱癌细胞的增殖、迁移侵袭能力。本研究通过进一步探究lnc-STYK1-2在膀胱癌发展中的作用及相关的分子调控机制,为寻找可能成为膀胱癌早期诊断及预后检测标志物、潜在的治疗靶点提供理论依据。研究方法1.构建稳定转染敲减lnc-STYK1-2的慢病毒质粒并转染人膀胱癌细胞系5637、T24,应用q RT-PCR技术检测lnc-STYK1-2的表达量;2.利用稳定转染敲减lnc-STYK1-2的5637、T24细胞系进行裸鼠皮下成瘤实验;3.对稳定转染敲减lnc-STYK1-2的5637、T24细胞系进行高通量测序,并对其中差异表达的RNA进行生物信息学分析;4.双荧光素酶报告基因检测实验验证lnc-STYK1-2与mi R-146b-5p、ITGA2与miR-146b-5p之间的相互关系;5.功能挽救（rescue）实验验证lnc-STYK1-2通过靶向mi R-146b-5p调控膀胱癌细胞的增殖、迁移和侵袭能力:（1）在稳定转染敲减lnc-STYK1-2的T24、5637细胞系中转染mi R-146b-5p inhibitors降低mi R-146b-5p的含量;（2）CCK-8实验检测细胞生长曲线的改变;（3）Transwell实验检测细胞迁移、侵袭能力的改变;6.利用Western blot实验验证敲减lnc-STYK1-2、敲减lnc-STYK1-2同时转染mi R-146b-5p inhibitors后对下游蛋白ITGA2的表达以及Akt/NF-κB/STAT3通路的影响;7.对以上实验结果进行统计学分析。研究结果1.q RT-PCR结果显示T24、5637敲减组细胞的lnc-STYK1-2的相对表达量显著低于阴性对照组,成功构建5637-sh-NC,5637-sh-lnc-STYK1-2,T24-sh-NC,T24-sh-lnc-STYK1-2稳定转染细胞系;2.敲减lnc-STYK1-2能够显著增加裸鼠皮下成瘤的速度;3.敲减lnc-STYK1-2的表达后,高通量测序共发现126个差异表达mRNA,其中17个上调的mRNA,109个下调的mRNA;KEGG pathway分析发现,敲减lnc-STYK1-2后差异表达的基因主要集中在肿瘤相关通路和AKT通路;q RT-PCR实验提示lnc-STYK1-2-mi R-146b-5p-ITGA2可能存在相互作用;4.双荧光素酶报告基因检测实验证实lnc-STYK1-2与mi R-146b-5p、ITGA2与mi R-146b-5p之间能互相结合;5.功能挽救实验显示在膀胱癌中lnc-STYK1-2可通过吸附mi R-146b-5p促进膀胱癌的增殖、迁移和侵袭功能;6.Western blot实验发现敲减lnc-STYK1-2后ITGA2、Akt、STAT3、p65的表达量降低,p-Akt、p-STAT3、p-p65的表达量升高;而敲减lnc-STYK1-2并降低mi R-146b-5p的含量,ITGA2、Akt、STAT3、p65的表达量升高,p-Akt、p-STAT3、p-p65的表达量降低。研究结论1.lnc-STYK1-2表达减少可促进膀胱癌细胞的生长;2.lnc-STYK1-2与mi R-146b-5p、ITGA2与mi R-146b-5p之间存在竞争性结合关系;3.在膀胱癌中lnc-STYK1-2可通过调节mi R-146b-5p/ITGA2并间接调控Akt/NF-κB/STAT3通路,促进膀胱癌的增殖、迁移和侵袭功能;