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本文建立了快速、灵敏、专属性强的液相色谱-串联质谱(LC-MS/MS)法测定生物样本中红景天苷的浓度,并分别进行药物动力学研究,代谢行为研究。建立了快速、专属性强的高效液相色谱(HPLC)法测定生物样本中红景天苷浓度的方法,并进行排泄行为研究。 一、大鼠血浆中红景天苷定量分析方法的研究及应用 目的:建立大鼠血浆中红景天苷浓度的LC-MS/MS测定方法,研究红景天苷在大鼠体内的药物动力学行为并研究其口服生物利用度。方法:选用Agela C18色谱柱,以乙腈-水(15∶85,v/v)为流动相,流速1.0 mL·min-1;利用沉淀蛋白法,采用多反应离子监测(MRM)模式进行负离子检测,检测的离子对为m/z299.1→m/z119.0(红景天苷,[M-H]-)和m/z127.9→m/z58.0(内标,表告依春,[M-H]-)。结果:红景天苷的线性范围为0.04~80μg·mL-1,最低定量限为0.04μg·mL-1。方法准确度(RE)为-3.8%~6.7%,日内和日间精密度均不大于5.7%。结论:本文建立的LC-MS/MS法,简单快速,专属性强,灵敏度高,分析周期短(每个样品的分析周期为5 min),适用于红景天苷药物动力学研究。 二、大鼠体内红景天苷代谢行为研究 目的:建立大鼠代谢物中红景天苷浓度的LC-MS/MS测定方法,研究静脉及灌胃给予红景天苷后在大鼠体内的代谢行为。方法:选用Agela C18色谱柱,以乙腈-水为流动相,梯度洗脱程序,流速1.0 mL·min-1;利用固相萃取法,采用多反应离子监测(MRM)模式进行负离子检测,二级全扫描质谱(full scan MS2)方式。结果:在大鼠尿液中发现了红景天苷原形药物及其两种代谢产物,在大鼠粪便中发现了一种代谢产物,其中酪醇为主要代谢产物。结论:本方法简便、快速,适用于大鼠体内红景天苷代谢产物结构及代谢途径分析。首次发现了酪醇脱氢化合物、酪醇脱氢硫酸结合物,进一步完善了红景天苷大鼠体内的代谢行为研究。 三、大鼠体内红景天苷排泄研究 目的:建立大鼠代谢物中红景天苷浓度的高效液相色谱测定方法,研究红景天苷在健康大鼠体内的尿药浓度。方法:选用Agela C18色谱柱,流动相为甲醇-水-甲酸(15∶85∶0.3,v/v/v);流速:1.0 mL·min-1,柱温为室温,采用固相萃取法提取代谢物中目标成分。结果:尿中内源性物质不干扰红景天苷的测定,红景天苷的线性范围为0.02~2 mg·mL-1,最低定量限为0.02 mg·mL-1。方法准确度(RE)为93.6%~96.5%,日内和日间精密度均不大于11.0%。结论:本文建立的高效液相色谱法,适用于红景天苷的排泄行为的研究。