【摘 要】
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背景和目的:热休克蛋白是一类基因序列高度保守的蛋白质,它对于细胞的氧化应激和凋亡都具有保护作用。热休克蛋白A12B(Heat shock protein A12B,HSPA12B)是新近发现的HSP70家
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背景和目的:热休克蛋白是一类基因序列高度保守的蛋白质,它对于细胞的氧化应激和凋亡都具有保护作用。热休克蛋白A12B(Heat shock protein A12B,HSPA12B)是新近发现的HSP70家族的新成员,主要表达于血管内皮细胞。前期研究中我们发现,高表达HSPA12B可显著改善细菌内毒素(lipopolysaccharide,LPS)所致的心功能损害,其机制可能与抑制心肌细胞的炎症反应有关。本研究旨在探讨HSPA12B对LPS所致人血管内皮细胞炎症反应的影响。方法:1.western blot方法检测LPS刺激HUVEC不同时间点HSPA12B的表达量2.si RNA敲降HUVEC中HSPA12B的表达(1)通过RT-PCR在m RNA水平验证HSPA12B敲降效率(2)通过western blot在蛋白水平验证HSPA12B敲降效率3.检测HUVEC在LPS刺激后的炎症反应(1)RT-PCR技术检测TNF-α、IL-6、VCAM-1及ICAM-1的表达量(2)ELISA方法检测TNF-α和IL-6从细胞的释放情况(3)黏附反应观察LPS对“PMN-HUVEC”黏附的影响4.检测HSPA12B敲降对LPS诱导的HUVEC炎症反应的影响(1)RT-PCR技术检测低表达HSPA12B的HUVEC中TNF-α、IL-6、VCAM-1及ICAM-1的表达量(2)黏附反应观察低表达HSPA12B的HUVEC细胞模型中HUVEC对PMN黏附率的变化结果:1.LPS刺激后HSPA12B表达呈现快速上升趋势2.si RNA转染使HUVEC中HSPA12B的m RNA水平和蛋白水平显著降低,提示HSPA12B敲降(knockdown)的HUVEC细胞模型构建成功。3.LPS刺激后,HUVEC中TNF-α、IL-6、VCAM-1及ICAM-1的m RNA水平较对照组均显著增加,培养上清中TNF-α和IL-6的释放量较对照组显著增加,HUVEC-PMN黏附率较对照组显著增加,提示HUVEC中炎症反应在LPS刺激后被显著激活。4.HSPA12B敲降后,进一步升高LPS所诱导的TNF-α、IL-6、VCAM-1及ICAM-1在m RNA水平、以及PMN-HUVEC的黏附。结论:本研究表明,HSPA12B是抑制LPS所致炎症反应所必须的。
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