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研究背景： 脂肪性肝病(FLD)俗称脂肪肝，包括酒精性脂肪性肝病（ALD）和非酒精性脂肪性肝病（NAFLD），是指脂质在肝脏组织内沉积超过肝脏重量的5％，或光镜下＞30%的肝细胞出现脂变的临床综合征。NAFLD的病理类型包括单纯性脂肪肝、脂肪性肝炎（NASH）及肝硬化，后者可发展为肝癌[1]。近年随着生活水平提高和饮食习惯改变，NAFLD的患病率不断提高，我们在广东省城乡人群调查发现脂肪肝患病率已达15%，接近发达国家20%-30%水平[2，3]。NAFLD的发病机制尚不完全清楚，治疗选择有限。微小RNA(microRNA，miRNA，miR)是一类长约21～22核苷酸的小分子非编码RNA，是动植物细胞内重要的转录后基因表达调控因子，通过RNA干扰，降解或抑制靶mRNA的翻译，调控蛋白编码基因的表达，在细胞生长、分化和死亡等过程中起重要作用，其表达的失调会引起疾病。miRNAs与肿瘤的关系报告最多，而与代谢性疾病及 NAFLD关系的研究较为欠缺[4]。本文探讨肝细胞株miR-122表达水平与肝脂肪变的关系，并观察转染模拟物miR-122前体（pre-miR-122）和抑制物miR-122抗体（anti-miR-122），对脂肪变肝细胞miR-122表达和脂肪含量的影响，从分子水平探讨NAFLD诊断的新标记物和治疗的新靶点。 目的： 探讨肝细胞株脂肪变后miR-122表达水平的变化，观察转染pre- miR-122及anti-miR-122对脂肪变肝细胞的miR-122表达和脂肪含量的影响。 方法： 1．用油酸诱导法建立肝细胞株（L-02）脂肪变模型。 2．制作正常肝细胞及油酸诱导24h、48h、72h的脂肪变细胞爬片：用亲脂性荧光染料尼罗红染色，激光共聚焦显微镜观察细胞内脂滴情况。利用Olympus Fluview ver.3.0 viewer软件分析细胞内脂滴荧光强度。同时用甘油三酯试剂盒检测正常肝细胞、油酸诱导24、48、72小时细胞株的甘油三酯含量。 3．检测miR-122表达：提取细胞总RNA，逆转录为cDNA，用荧光定量PCR检测正常肝细胞及油酸诱导脂肪变细胞miR-122的表达。 4．转染miR-122模拟物和抑制物：瞬时转染按照Lipofectamine2000说明书进行。除未转染脂肪变细胞组外，设模拟物实验组（miR-122 mimic）、模拟物对照组（mimic C）、抑制物实验组（anti-miR-122）、抑制物对照组（inhibitor C）。分别用合成的pre-miR-122及其对照物、anti-miR-122及其对照物进行转染，干扰后6小时评价转染效率，72小时检测miR-122表达水平，同时观察转染前后细胞内脂滴变化。 5．统计分析各实验组数据以均数±标准差表示，采用SPSS16.0统计软件分析。满足正态分布或经转换后满足正态分布的计量资料两组间比较采用独立样本t检验，分布不满足正态时采用非参数检验，显著性水平为P<0.05。 结果： 1．成功建立体外脂肪肝细胞株模型：油酸诱导24h、48h、72h细胞内出现红色脂滴。应用激光共聚焦显微镜结合Olympus Fluview ver.3.0 viewer软件对脂滴进行分析，显示脂肪变肝细胞内脂滴平均荧光强度显著高于对照肝细胞（24h时860.01±26.52 vs257.77±29.69）（P<0.001），且随着油酸诱导时间延长（24h、48h、72h），脂肪变肝细胞内脂滴平均荧光强度逐渐增强（P<0.05）。用甘油三酯试剂盒检测细胞内甘油三酯含量显示，脂肪变肝细胞内甘油三酯含量较对照肝细胞显著增加(24h时3.47±0.116 vs1.865±0.015)（P<0.01），并随着油酸诱导时间延长（24h、48h、72h）而逐渐增加（P<0.05）。 2．脂肪变肝细胞 miR-122表达显著下调，其表达拷贝数仅为正常肝细胞的1/21.74（P<0.05）。 3．脂肪变肝细胞转染对照物mimic C和inhibitor C后，两对照组miR-122表达和未转染的脂肪变肝细胞比较差异不显著（P>0.05）。而转染miR-122 mimic后，脂肪变肝细胞miR-122的表达显著增加，是未转染的脂肪变细胞2.96倍（P<0.05），其细胞内脂滴平均荧光强度（790.92±46.72）较未转染脂肪变肝细胞（1022.16±49.66）显著减少（P<0.05）；转染 anti-miR-122后，脂肪变肝细胞miR-122的表达量显著减少，是未转染的脂肪变肝细胞1/3.45（P<0.05），其细胞内脂滴平均荧光强度（1386.49±403.44）较未转染脂肪变肝细胞（1022.16±49.66）显著增加（P<0.05）。 结论： 1．肝细胞脂肪变后miR-122表达显著下降。 2．对脂肪变肝细胞转染miR-122模拟物后细胞内miR-122表达显著增高，而脂含量显著减少；转染miR-122抑制物后细胞内miR-122表达显著降低，而脂含量显著增加。 3．miR-122参与脂肪性肝病的发病机制。