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目 的:建立测定血尿浓度的2,4-二氯酚定量法,并对其进行方法学研究,以提高检测方法的准确性和灵敏度。将该法初步应用于临床,为疾病的检测和监测提供重要信息。方 法:根据血红蛋白(Hb)中亚铁血红素具有类过氧化物酶的活性, 可催化反应色原剂2,4-二氯酚(2,4-DCP)生成红色醌类物质的原理,通过摸索最适反应条件和与其它方法的比较分析,建立了直接测定法和沉淀测定法,两者各项分析误差均在可接受的范围。考虑到临床工作的便利,采用直接测定法对500例健康体检者和271例患者尿液进行检测,初步确定直接测定法血尿参考值范围(mg/g·Cr)以及研究该法的临床应用价值。结 果:1、通过大量试验,选择了反应显色剂、表面活性剂以及反应介质;确定了试剂浓度及比例、反应时间和反应温度等,设定了全自动生化分析仪法仪器参数。2、本法在血尿浓度0~400mg/L之间线性较好,血尿浓度与A520nm值的回归方程为y=0.0045x+0.3275(r=0.966)。通过测定不同浓度的血尿标本,分别得出直接测定法和沉淀测定法的批内CV值和批间CV值以及回收试验的平均回收率。3、尿中胆红素浓度达240 μmol/L时,对测定结果无影响(P>0.05)。维生素C浓度为350 μmol/L时,对测定结果无影响(P>0.05),但当维生素C浓度达到550 μmol/L 时,标本所得吸光度值只有原标本吸光度值的70%。 <WP=4>4、经SAS6.12版软件分析,采用直接测定法对500例健康体检者尿Hb浓度测定的结果显示为正态分布(P<0.05)。各年龄组之间的差异无统计学意义(P>0.05), 但性别组之间尿Hb浓度差异有显著性统计学意义(t=3.12,P<0.01)。健康体检者男(n=268)、女(n=232)尿Hb浓度直接测定法参考值范围分别为0~17.6mg/g·Cr和0~23.8mg/g·Cr。5、将该直接测定法应用于临床,研究了171例非肿瘤泌尿系疾病患者血尿阳性率,20例肾移植患者术后发生早期急性排斥反应时血尿、血肌酐和尿素氮三者浓度变化的动态关系,可以为疾病的检测和监测提供重要信息。结 论:在临床工作中,血尿是泌尿系统疾病常见而重要的症状之一。由于对血尿测定的影响因素较多,且目前国内外用于检测血尿的方法多为定性或半定量,本研究建立的血尿测定2,4-二氯酚定量法不仅具有灵敏度较高、重复性较好等特点,而且可以采用全自动生化分析仪法和手工法定量测定血尿浓度。将其应用于不同条件的医院,可以为某些疾病患者血尿的检测和监测发挥重要的作用。