【摘 要】
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目的:长链非编码RNA是潜在的原发性肝癌的生物学标志物。我们希望通过这篇研究鉴别出原发性肝癌相关的长链非编码RNA,并进一步阐述其在原发性肝癌发生与发展过程中的作用机制
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目的:长链非编码RNA是潜在的原发性肝癌的生物学标志物。我们希望通过这篇研究鉴别出原发性肝癌相关的长链非编码RNA,并进一步阐述其在原发性肝癌发生与发展过程中的作用机制。方法:实时定量PCR检测LINC01225在肝癌组织,肝癌细胞系,肝癌患者血清及正常人血清中的表达水平。利用慢病毒-短发卡RNA构建LINC01225稳定敲低细胞系。在LINC01225敲低细胞系中转染LINC01225过表达质粒。体外实验:采用CCK8实验、EdU法检测细胞增殖能力,Transwell实验检测细胞侵袭能力,流式细胞术检测细胞抗凋亡能力及周期的改变。体内实验:裸鼠皮下荷瘤观察肿瘤细胞的体内增殖能力,构建腹腔转移模型观察细胞侵袭能力,通过尾静脉注射悬浮肿瘤细胞观察肺部转移灶来探究肿瘤细胞转移能力的改变。机制研究:实时定量PCR, western blot技术,基因芯片技术,质谱分析,免疫共沉淀等技术分析LINC01225在肝癌中的作用机制。结果:我们发现LINC01225在肝癌中呈高表达。敲低LINC01225后,肝癌细胞系MHCC97H, SMCC7721的增殖及侵袭能力受到明显抑制,并呈现出细胞周期阻滞及抗凋亡能力的减弱。在LINC01225敲低细胞系中再表达LINC01225,细胞的增殖及侵袭能力得到恢复和增强。敲低LINC01225使肿瘤的生长和转移受到抑制。机制研究发现,LINC01225能够与内皮生长因子受体结合,调节EGFR蛋白水平,继而调控EGFR/Ras/Raf-1/MEK/MAPK信号通路,从而在肝癌的发生与发展中发挥调控作用。另外,我们发现LINC01225的表达水平与肝癌病人的预后明显相关,并且LINC01225在肝癌病人血清中呈稳定性高表达,可以作为肝癌诊断的生物学标志物。结论:LINC01225在原发性肝癌中发挥着重要作用。LINC01225可以作为原发性肝癌诊断和预后判断的生物学标志物。
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