【摘 要】
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褐藻胶是一种天然存在的阴离子聚合物,通常在褐海藻中获得。利用经过自然腐烂的天然褐海藻以及以褐藻为食的海洋生物的内脏,筛选出能降解褐藻胶的目的菌株,通过对其发酵产酶条件的优化,使之能够高效降解褐藻胶。褐藻胶经褐藻胶裂解酶降解后,成为具有多种生物活性的褐藻寡糖,其研究与应用前景广泛。本文首先进行了产酶菌株的筛选,然后通过单因素实验和响应面分析法对发酵条件进行优化,并研究了该酶的部分酶学性质,为后续实际
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褐藻胶是一种天然存在的阴离子聚合物,通常在褐海藻中获得。利用经过自然腐烂的天然褐海藻以及以褐藻为食的海洋生物的内脏,筛选出能降解褐藻胶的目的菌株,通过对其发酵产酶条件的优化,使之能够高效降解褐藻胶。褐藻胶经褐藻胶裂解酶降解后,成为具有多种生物活性的褐藻寡糖,其研究与应用前景广泛。本文首先进行了产酶菌株的筛选,然后通过单因素实验和响应面分析法对发酵条件进行优化,并研究了该酶的部分酶学性质,为后续实际应用提供了前期基础。本文研究结果如下:(1)菌株的初筛及复筛:以腐烂的马尾藻、龙须菜、角叉菜以及黑鱼、海螺的内脏为原料,以海藻酸钠为单一碳源进行平板初筛,利用碘液进行透明圈检测,其中有透明圈的菌株包括LX-1、LX-2、TS-1、TS-2、TS-5、BY-3、BY-4、BY-6。通过DNS定糖法得到较高酶活的目标菌株TS-5。(2)单因素及响应面分析法:对菌株进行了单因素条件的优化,从而确定了最适培养基的组成成分:碳源为海藻酸钠,浓度为1%;氮源为蛋白胨,浓度为1.1%;氯化钠浓度为1.5%;初始p H为7;温度为30℃;转速为170 rpm;接种量为3%。酶活较最初提高了50.79%。在单因素实验基础上进行响应面分析实验,表明温度、接种量、碳源浓度是对产酶能力影响最显著的三因素。通过软件预测发酵条件为:温度24℃,接种量为3.198%,碳源浓度为1.161%,酶活达到了72.86 U/m L。(3)酶学性质的研究:发酵液离心得到粗酶液,通过硫酸铵分级盐析进行初步的分离纯化,对酶液进行酶学性质的研究,结果表明,底物特异性方面:该酶能同时降解海藻酸钠、Poly M和Poly G,但对Poly G的降解能力较弱,主要降解Poly M,其次为海藻酸钠;最适反应温度为40℃,50℃时酶活稳定在80%以上,在10-40℃范围内保温1 h酶活稳定,高于50℃时酶活逐步下降;最适p H为7.0且p H为6.5-8.5时酶活稳定,相对酶活能达到最高酶活的80%-90%;金属离子对其酶活的影响为:Na+、K+、Mg2+、Ca2+对酶活均有促进作用,但是Na+对其酶活影响更加显著,K+、Mg2+、Ca2+虽有促进但是作用效果不明显。Fe2+、Cu2+、Zn2+、Mn2+则对酶活起到抑制作用。络合剂EDTA可明显抑制其酶解活力,SDS对其基本没有抑制作用。
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