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牡丹(Paeonia sect.Moutan)是我国著名的观赏花木,传统繁殖方法难以实现其优质种苗的规模化生产,而组织培养技术具有繁殖系数高、易成苗的优势。经过多年研究初步形成体系。但有关紫斑牡丹(Paeonia rockii)以鳞芽为外植体进行快繁鲜有报道;且一些优良品种的离体快繁体系尚未运用到工厂化育苗中,在技术环节上仍然存在增殖率低、生根困难等问题亟待突破。本文以紫斑牡丹及两个远缘杂交品种‘正午’(Paeonia×lemoinei‘High Noon’)和‘皇冠’(Paeonia×lemoinei‘Yellow Crown’)的鳞芽为研究对象,从无菌培养体系的建立、增殖培养、生根培养、驯化移栽等4个阶段展开研究。主要研究结果如下:1.紫斑牡丹离体快繁技术体系初步建立:(1)无菌培养体系的建立:7个紫斑牡丹品种中,‘京华晴雪’启动培养表现最优,萌发率为100%且腋芽分化数为4.68;其中,以‘京华晴雪’为研究材料发现,基本培养基启动培养效果依次为改良WPM>DKW>SH>B5;在WPM培养基中,当NH4NO3浓度为200~400mg/L,Ca(NO3)2浓度为1668~2224mg/L时外植体分化效果最好;(2)增殖培养:‘京华晴雪’组培苗在改良WPM培养基中继代培养增殖困难、玻璃化严重死亡,而在DKW培养基中附加MT0.5mg/L+GA30.1mg/L时增殖率达3.17,有效解决了紫斑牡丹增殖率低且玻璃化严重的问题,继代培养次数以3次为佳;(3)生根培养:活性炭复壮培养30d对‘京华晴雪’无促根作用;活性炭的吸附作用会导致试管苗质量降低从而难以生根,根诱导培养基中附加1.0 mg/LIBA时‘京华晴雪’生根率最高为37.2%,根系愈伤组织少;(4)驯化移栽:将生根苗置于4℃低温下暗培养7天打破休眠,以有无新叶和愈伤组织大小为分级标准,‘京华晴雪’的一级生根苗(萌生健壮新叶,根部无愈伤组织)移栽60d后成功获得移栽苗,成活率最高为30%。2.‘正午’和‘皇冠’牡丹离体快繁体系的优化:(1)增殖培养:‘皇冠’组培苗褐化严重,2.0mg/L的Ag NO3能够有效改善‘皇冠’褐化严重的问题;在改良WPM中附加BA0.2mg/L+GA30.1mg/L+ZT0.05mg/L时;‘皇冠’增殖率由原来的1.81提升至3.2,最佳继代次数为3次;‘正午’牡丹芽原座增殖潜力巨大,在改良WPM培养基中添加MT0.5mg/L+GA30.2mg/L+ZT0.2mg/L,次生芽丛增殖系数为3.58,大大提升了繁殖效率;10mg/L间苯三酚能改善‘正午’高继代不定芽的的质量;硅酸盐浓度为5~15mg/L会导致‘正午’和‘皇冠’生长发育迟缓,因此不建议使用;(2)生根培养优化:MT复壮培养30d有利于‘正午’和‘皇冠’生根,且基部愈伤组织极少;IBA0.5mg/L+NAA0.1mg/L激素浓度组合诱导‘皇冠’生根效果好,生根率由28.96%提升至35.57%;不同外源酚酸类添加剂的促根作用不同,绿原酸能显著增加‘正午’和‘皇冠’的根数,但基部愈伤明显;间苯三酚能改善‘正午’试管苗的生根质量,生根率为48.22%;香豆素的使用会阻碍‘正午’生根;(3)驯化移栽:0.2mg/L赤霉素能解除‘正午’生根苗的休眠,移栽成活率为55%,移栽苗抽出新叶对存活起关键作用,‘正午’和‘皇冠’一级苗在移栽60d后成活率分别为40%和33%。