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在我国,肢端雀斑样黑素瘤(ALM)是黑素瘤的主要类型,其生物学行为、发展和预后与其它类型黑素瘤相比存在很大的不同,但是关于ALM基因表达的研究不是很多,我们选取HINT1/PKCI-1和FAK两个基因,比较研究它们在ALM和普通痣细胞痣表达的差异,为寻找ALM新的诊断和预后指标以及新的治疗靶位打下基础。并探讨从存档皮肤组织中提取RNA进行逆转录PCR反应的可行性和稳定性,并与原位杂交和免疫组化的结果进行比较,为今后利用存档组织标本进行基因RNA表达水平的回顾性研究打下基础。 本文首先用蛋白酶K消化和异硫酸氰胍—酸性苯酚法提取石蜡包埋组织中RNA,进行逆转录PCR反应。探讨并优化了在不同储存时间段的石蜡包埋组织中提取RNA和RT-PCR的条件,比较了不同扩增片段长度和分别以随机引物、特异性下游引物作为逆转录引物对RT-PCR结果的影响。发现扩增片段<120bp、采用特异性下游引物为逆转录引物的RT-PCR的结果稳定,不同储存时间的组织间无差异。比较了5例标本分别经福尔马林固定石蜡包埋和直接冻存提取RNA进行RT-PCR的结果,mRNA表达的水平均由与管家基因的相对比值来表示,结果石蜡组织与新鲜组织的结果高度一致。在此基础上比较了25例ALM和25例NN中HINT1/PKCI-1和FAK mRNA表达水平的不同,并分别与原位杂交和免疫组化的结果进行对比。 半定量逆转录PCR方法检测25例NN(20例新鲜组织、5例石蜡组织)组织中HINT/PKCI1mRNA平均表达水平为0.4929±0.0409,25例MM(均为ALM,其中19例石蜡组织、6例新鲜组织)组织中HINT/PKCI-1mRNA平均表达水平为0.3112±0.0691,MM与NN相比表达明显下降,有统计学差异(P<0.05),但不同Clark分级和Breslow厚度的ALM组织间HINT1/PKCI-1 mRNA表达无差异(P>0.05)。原位杂交结果显示HINT1/PKCI-1mRNA在细胞胞浆表达,但在MM中表达弱或阴性,在NN中表达较强,两组间差异显著(P<0.05)。HINT1/PKCI-1mRNA在A、B、C三型痣细胞中都表达,在表皮细胞中广泛表达。原位杂交和RT-PCR结果一致性好。