根据GenBank中美洲型猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)的N基因序列，设计合成一对引物，应用RT-PCR方法扩增出PRRSV北京分离株的N基因。将所扩增片段克隆入原核表达载体pET-32a(+)，重组质粒转化DH5a宿主菌后，经双酶切、PCR鉴定后挑选阳性克隆进行序列测定。用DNAStar软件分析N基因序列，并与VR-2332株、LV株、周边国家及国内分离株进行核苷酸和推导氨基酸同源性比较，并构建了系统发育进化树。结果表明，N基因的原核表达载体构建成功，命名为pET-N:测序结果显示N基因全长372bp，包含完整的N基因的开放阅读框架，编码123个氨基酸；经序列分析发现，N基因与美洲型核苷酸同源性为92.8％～96.5％，与LV株核苷酸同源性为68.3％；推导的氨基酸与美洲型同源性为92.0％～96.0％，与LV株同源性为66.7％，系统进化树表明该PRRSV属于美洲型。 将重组质粒pET-N转化入表达宿主菌BL21(DE3)，挑选阳性菌，37℃扩大培养，用IPTG进行诱导表达。对培养条件及诱导表达条件(诱导温度、IPTG最佳浓度和作用时间)进行优化，其表达产物用SDS-PAGE分析。结果表明pET-N在BL21(DE3)中成功表达，所表达的重组蛋白分子量为33KDa左右，与预期大小相符。优化实验确定了重组蛋白的最佳诱导表达条件：IPTG终浓度1.0mM，30℃诱导3～4h，且诱导表达4h后表达蛋白量达到高峰，蛋白表达量约占菌体蛋白的50％。蛋白的可溶性分析表明表达产物主要以包涵体形式存在。本实验应用Ni-NTA His-Bind树脂层析柱在变性条件下纯化目的蛋白，取少量纯化产物进行SDS- PAGE，结果在33KDa处出现清晰单一的特异性蛋白条带，表明表达产物的纯化良好。Western blotting分析结果显示，重组蛋白与PRRSV阳性血清有特异性结合反应，说明表达的蛋白具有良好的免疫反应性，表达蛋白可用作基因工程诊断抗原。 本研究为进一步研究N蛋白的结构、功能和开发新型诊断试剂盒提供了理论与物质基础。