论文部分内容阅读
目的探讨香烟烟雾提取物(CSE)对慢性阻塞性肺疾病(COPD)患者单核细胞源性巨噬细胞(MDM)吞噬功能的影响及氧化损伤。方法选择COPD患者32例,健康体检者32例作为研究对象。分离外周血单个核细胞,收集贴壁的单核细胞,体外培养并诱导产生单核细胞源性巨噬细胞(MDM)。根据实验要求将COPD患者的MDM分为空白对照组(A组)、CSE干预组(B组)；健康体检者的MDM也分为空白对照组(C组)及CSE干预组(D组)。采用MTT比色法检测CSE对MDM活性的影响；流式细胞术结合激光扫描共聚焦显微镜检测各组细胞吞噬荧光素异硫氰酸酯标记的大肠杆菌(FITC-E.coli)(?)的吞噬能力；分光光度计检测CSE干预前后细胞上清液中总抗氧化能力(TAC)、丙二醛(MDA)及谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-PX)的水平。结果(1)随着CSE作用时间及浓度的增加,细胞存活率下降。(2)流式细胞术显示：A组吞噬FITC-E.coli的平均荧光强度(MFI)(20.22±2.22)低于C组(56.90±6.68)(P<0.01);B组的MFI(7.65±0.70)较A组下降(P<0.01)；D组MFI(47.95±5.35)较C组下降(P<0.01)；B组较A组MFI下降的程度(61.92±4.01%)较D组较C组下降程度(15.23±9.16%)更为明显(P<0.01)。(3)激光扫描共聚焦显微镜检测可观察到COPD患者MDM吞噬FITC-E.coli的能力较健康体检者明显降低，CSE对两组MDM干预后其吞噬能力均有所下降,A组吞噬FITC-E.coli的荧光吸光度值(51.43±5.85)低于C组(87.33±7.29)(P<0.01)；B组的(14.11±3.36)较A组下降(P<0.01);D组(69.72±5.97)较C组下降(P<0.01)；B组较A组下降的程度(71.81±8.79%)较D组较C组下降程度(20.06+8.20%)更为明显(P<0.01);(4)A组TAC、GSH-PX水平(4.06±0.23,47.10±4.13)U/ml低于C组(5.14±0.29,88.40±2.31)U/ml,MDA水平(4.75±0.53)nmol/ml高于C组(2.10±0.28)nmol/mlP均<0.01；B组(3.07±0.32,26.75±6.19)U/ml较A组TAC、GSH、PX水平下降(P均<0.01),MDA水平(7.72±0.85)升高(P<0.01)；D组(4.47±0.36、72.23±5.14)U/ml较C组TAC、GSH-PX水平下降(P均<0.01),MDA水平(2.95±0.56)nmol/ml升高(P<0.01)；B组较A组TAC、GSH-PX下降程度(24.51±6.71%、43.40±11.91%)较D组较C组下降程度(13.05±5.13%,18.21±5.79%)更明显(P均<0.01),B组较A组MDA的升高程度(38.20±5.58%)较D组较C组升高程度(26.17.±1.76%,)明显(P<0.05)。(5)相关性分析显示：基础状态下COPD患者吞噬FITC-E.coli的MFI与TAC、GSH-PX成正相关(r值分别为0.523和0.818,P)分别<0.05,P<0.01),与MDA成负相关(r值为0.501,P<0.05),TAC与GSH-PX成正相关(r值为0.615,P<0.01),MDA与TAC、GSH-PX成负相关(r值分别为0.596和0.615,P均<0.05)。CSE干预后COPD患者吞噬FITC-E.coli的MFI与FAC. GSH-PX成正相关(r值分别为0.704和0.716,P均<0.01),与MDA成负相关(r值为0.522,P<0.05),TAC与GSH-PX成正相关(r值为0.714,P<0.01),MDA与TAC、GSH-PX成负相关(r值分别为0.712和0.532,P分别<0.01,<0.05)。结论CSE浓度增加,作用时间延长,对MDM的活性影响作用增大,呈剂量-效应关系和时间效应关系；COPD忠者MDM的吞噬FITC-E.coli能力较健康者明显下降,提示AECOPD可能与巨噬细胞吞噬能力下降相关；CSE能够使COPD忠者MDM的吞噬FITC-E.coli能力进一步下降,CSE对COPD忠者MDM吞噬功能的影响较其对健康者MDM影响更明显；CSE可以增加COPD忠者氧化应激水平,且其对COPD患者的MDM氧化损伤作用较对健康者的影响明显：CSE导致CPOD患者MDM吞噬能力的下降与氧化应激密切相关,这可能是CSE导致COPD患者MDM的吞噬能力下降的重要原因之一。