【摘 要】
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茯苓皮是茯苓菌核的干燥外皮,含有丰富的活性物质,但其在茯苓加工过程中往往被当成副产物丢弃,导致活性资源的严重浪费。目前,国内外对茯苓皮的研究主要集中在三萜类物质上,而对茯苓皮多糖(Poria cocos peels polysaccharides,PCPP)的关注相对较少。电离辐射在工业、医疗以及军事领域应用十分广泛,然而长期受到电离辐射会对机体健康造成不利的影响。由于人工合成的辐射防护剂存在毒副
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茯苓皮是茯苓菌核的干燥外皮,含有丰富的活性物质,但其在茯苓加工过程中往往被当成副产物丢弃,导致活性资源的严重浪费。目前,国内外对茯苓皮的研究主要集中在三萜类物质上,而对茯苓皮多糖(Poria cocos peels polysaccharides,PCPP)的关注相对较少。电离辐射在工业、医疗以及军事领域应用十分广泛,然而长期受到电离辐射会对机体健康造成不利的影响。由于人工合成的辐射防护剂存在毒副作用大、成本高、时效短等缺点,寻找安全高效、成本低、适宜长期服用的天然辐射防护剂已逐渐成为研究热点。基于此,本研究首先采用响应面法优化PCPP的提取条件,并对其体外生物活性(抗氧化、免疫调节、辐射防护)进行研究。其次,通过建立60Co-γ射线小鼠损伤模型探究PCPP的体内辐射防护作用。最后,对PCPP进行分离纯化,鉴定并表征其发挥辐射损伤防护作用的主要成分。主要研究结果如下:(1)PCPP的提取优化与体外抗氧化活性、免疫调节功能和辐射防护作用探究通过响应面法优化PCPP的提取条件,并对其体外抗氧化、免疫调节和辐射防护活性进行探究。结果表明,PCPP的最优热水浸提制备条件为:液料比为24.19m L/g、提取时间5.54 h、提取温度100℃,得率为0.71%。PCPP的生物活性研究结果表明,PCPP具有显著的体外抗氧化活性,对DPPH自由基、ABTS自由基的清除能力和还原力呈剂量依赖性增加;此外,PCPP能够通过促进小鼠RAW264.7细胞的增殖活性、吞噬功能以及分泌NO的能力进而发挥其良好的免疫调节作用。最后,通过建立体外正常肝细胞AML-12辐射损伤模型,发现PCPP可促进AML-12细胞增殖发挥良好的体外辐射防护作用。(2)PCPP对60Co-γ辐射诱导小鼠损伤的防护作用研究通过建立小鼠60Co-γ辐射损伤模型,系统评估PCPP的体内辐射防护功能。结果表明,PCPP可有效减轻辐射对小鼠脾脏和肝脏的损伤程度;同时通过调节红细胞、血小板和血红蛋白减少程度来缓解辐射对造血系统的损伤。此外,PCPP可显著提高辐射后小鼠的血清、肝脏和脾脏中超氧化物歧化酶(SOD)活性和谷胱甘肽(GSH)含量,相应降低脂质过氧化物丙二醛(MDA)的积累,同时能够显著减少小鼠血清和肝脏中谷草转氨酶(AST)和谷丙转氨酶(ALT)水平。以上结果综合表明,PCPP能有效减轻辐射引起的小鼠机体氧化损伤程度,提示其可作为天然辐射防护剂开发的潜在资源。(3)PCPP主要活性组分的纯化、生物活性鉴定及初步结构表征首先,PCPP分别经DEAE-52纤维素离子交换柱和Sephadex G-100葡聚糖凝胶色谱柱纯化后获得均一多糖组分PCPP-1A,多糖含量91.82±2.64%。其次,对PCPP-1A生物活性进行验证。结果表明,与PCPP相比,PCPP-1A同样具有良好的免疫调节活性以及对AML-12细胞具有辐射防护作用,初步鉴定其是PCPP发挥辐射防护活性的主要有效成分。最后,利用高效液相色谱、光谱分析、刚果红实验、高碘酸氧化、核磁共振和电镜分析等多种手段对PCPP-1A的结构组成进行鉴定。结果表明,PCPP-1A是一种分子量为45.38 kDa的多糖,其单糖组为由甘露糖、葡萄糖醛酸、葡萄糖、半乳糖和岩藻糖,摩尔比为10.93:1.00:235.76:26.99:6.56。红外光谱结果显示,PCPP-1A含有O-H、C-H键、吡喃环和α型糖苷键等多糖特征吸收峰。高碘酸氧化与刚果红实验表明PCPP-1A中含有1-2,1-4,1-2,6或1-4,6糖苷键,不具有三股螺旋结构。NMR分析结果表明PCPP-1A可能含有吡喃葡萄糖,并通过α型糖苷键和β型糖苷键连接。综上所述,茯苓皮多糖是一种具有良好的抗氧化活性、免疫调节功能以及辐射损伤防护作用的生物大分子。本研究不仅为茯苓皮的综合利用提供了新的思路,还为其作为抗氧化剂、免疫调节剂和辐射防护剂的开发奠定了理论基础。
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