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目的：构建携带CD-UPRT融合自杀基因重组腺病毒载体，用其感染人肺腺癌细胞A549。分别给予前体药物5-FC、5-FU，观察CD-UPRT对A549细胞的杀伤效应，探讨CD-UPRT/5-FC系统的旁观者效应（BE）及其对细胞周期的影响。研究CD-UPRT/5-FC系统联合化疗药物泰素帝（docetaxel）对A549细胞的协同杀伤作用，初步探讨二者联用的作用机制。为探索肺癌治疗的新途径提供实验和理论基础。方法：（1）将携带CD-UPRT融合自杀基因的重组腺病毒质粒转染入293细胞，在293细胞内包装并批量制备体外实验所需重组腺病毒AdCD-UPRT。TCID50（tissue culture infectious dose50）法测定病毒滴度，并利用GFP及有限稀释法测定重组腺病毒感染靶细胞的效率，同时以MTT法检测其对靶细胞的毒性。采用RT-PCR法检测A549细胞中重组腺病毒介导的CD-UPRT基因的表达。（2）以MTT法分别观察CD-UPRT / 5-FU系统和CD-UPRT /5-FC系统对A549细胞的细胞毒性。将感染与未感染细胞以不同比例混合，观察CD-UPRT /5-FC系统的旁观者效应。采用流式细胞仪分析CD-UPRT /5-FC系统对细胞周期的影响。（3） 观<WP=8>察化疗药物泰素帝对A549细胞的体外抑制作用，获得泰素帝的半数抑制浓度（IC50）。联合泰素帝与CD-UPRT /5-FC系统作用于A549细胞，观察泰素帝联合CD-UPRT /5-FC系统对A549细胞的杀伤效应。分别采用AO-EB荧光染色、电镜和流式细胞仪等方法对CD-UPRT /5-FC系统和泰素帝联用、单用时细胞的凋亡情况进行检测。结果：（1）成功包装重组腺病毒AdCD-UPRT，其滴度为1×108 PFU/ ml。AdCD-UPRT感染靶细胞A549的MOI为250，仅在MOI大于1000 时AdCD-UPRT才对A549细胞显示出明显毒性。RT-PCR检测到了CD和UPRT基因的mRNA表达。（2）前体药物5-FC、5-FU对感染了AdCD-UPRT的A549细胞显示出明显的细胞毒性，并呈剂量依赖关系 。经CD-UPRT /5-FC系统作用后的A549细胞细胞周期发生显著变化，G0/G1期细胞减少，S期细胞增多。CD-UPRT /5-FC系统存在旁观者效应，感染细胞占混合细胞的10%时，细胞抑制率已达31.7%。（3）化疗药物泰素帝在体外对A549细胞的生长存在抑制作用并呈剂量依赖关系，其IC50为13.42×10-6μg/ml。联用低浓度泰素帝能增强CD-UPRT /5-FC系统的体外抑瘤作用，5-FC的IC50由10.78μg/ml下降到1.33μg/ml。单用CD-UPRT /5-FC系统和低浓度泰素帝均能诱导细胞发生部分凋亡，但二者联用时细胞凋亡现象较单用时更为显著。结论：（1）CD-UPRT融合自杀基因能通过重组腺病毒载体成功地转入A549细胞并有效表达，而且不影响细胞的生长特性。（2）CD-UPRT /5-FC系统对A549细胞有较强的细胞毒作用，作用分子靶点为DNA合<WP=9>成期（即S期）。应用CD-UPRT /5-FC系统能产生明显的旁观者效应，可以放大其对肿瘤的杀伤作用。（3）联合低浓度化疗药物泰素帝能增强CD-UPRT /5-FC系统对A549细胞的杀伤效应，同时这种联合还可以发挥协同促凋亡作用，此种联合策略可能是提高自杀基因治疗肿瘤疗效的另一重要途径。