机体总抗氧化力的氨基酸和基因基础以及氧化对抗体活性及其它实验室指标的影响

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目的:本文通过研究氨基酸和蛋白的抗氧化能力,了解机体的抗氧化力的影响因素;并探讨氧化是否对蛋白抗体活性产生影响;同时对随机选取的糖尿病、心血管等疾病病人的抗氧化能力、常用生化指标以及胆固醇酯转运蛋白(cholesteryl estertransfer protein,CETP)基因3个多态位点(TaqIB、I405V、D422G)进行了检测,来探讨氧化-抗氧化系统与基因多态性、以及常用实验室指标之间的关联。方法:1.对于抗氧化能力的测定,选取了氧化还原滴定法(微量高锰酸钾法、微量碘量法)和T-AOC试剂盒法3种方法对组成人体蛋白质的常用22种氨基酸进行了分析。2.把已得到的氨基酸抗氧化能力强弱的数据,与在“全球蛋白质知识库“和“蛋白质的一级结构数据库”中查询的蛋白质的氨基酸构成的数据信息结合,了解蛋白的抗氧化能力。3.在医院随机采集140名与糖尿病、心血管相关的病人的血液标本,平均年龄为59.93±11.31岁,男女比例为61:79,利用特异性PCR技术(AS-PCR)对血液标本进行CETP基因多态位点(TaqIB、I405V、D422G)进行检测;同时检测常用生化指标值(葡萄糖、总蛋白、球蛋白、白蛋白、白球比、谷丙转氨酶、谷草转氨酶、尿素、肌酐、尿酸、总胆固醇、甘油三脂、高密度脂蛋白胆固醇、低密度脂蛋白胆固醇),并应用微量高锰酸钾法、微量碘量法和总抗氧化能力检测(T-AOC)试剂盒法3种方法对他们的血清抗氧化能力测定,探讨机体氧化、抗氧化能力与CETP基因多态性以及生化指标之间的联系。4.分别拟用3种不同的氧化剂(高锰酸钾溶液、碘溶液、过氧化氢溶液)以适当的比例与血清抗体(卵清蛋白和乙型肝炎表面抗体)混合,作用一段时间后,再对卵清抗体和乙型肝炎表面抗体进行酶联免疫吸附试验(ELISA)比较检测结果。结果:1.对3种方法测得的数据应用SPSS13.0统计软件求取二次曲线,再利用积分公式求曲线下面积得到抗氧化能力值,然后对所得的数值进行编秩排序得到22种氨基酸抗氧化能力由强到弱的顺序为:具有较强抗氧化能力的氨基酸为色氨酸、蛋氨酸、酪氨酸、组氨酸、赖氨酸、半胱氨酸;抗氧化能力较弱或几乎没有活性者为丙氨酸、4-羟脯氨酸、精氨酸、苯丙氨酸、脯氨酸、苏氨酸、甘氨酸、缬氨酸、丝氨酸、亮氨酸、谷氨酰胺、天冬酰胺、胱氨酸、异亮氨酸、谷氨酸、天冬氨酸。2.人血清不同种类蛋白(人血清蛋白、牛血清白蛋白、卵清蛋白、球蛋白、组蛋白)的抗氧化能力除了精蛋白外彼此相关性P<0.05,提示蛋白的抗氧化能力差别不大。3.机体表现出氧化或抗氧化活性与CETP多态基因的等位基因D有相关性,与某些血清生化指标也相关。4.高锰酸钾和碘对卵清抗体免疫反应的影响都是以某一浓度为界限,高于某个浓度,它们起到抑制作用,低于某个浓度,它们便起到轻微的促进作用;过氧化氢对卵清抗体的免疫反应是在高于某一浓度都起到轻微的促进作用,而没有抑制的现象;高锰酸钾对乙肝表面抗体的免疫反应,在高于某浓度时起抑制作用,升高趋势不明显;碘对乙肝表面抗体的免疫反应的影响也以某浓度为界限,浓度高起抑制作用,浓度低起轻微促进作用;过氧化氢对乙肝表面抗体免疫反应的影响为,在一定浓度范围内均起到抑制作用。结论:1.血清蛋白的抗氧化能力可能与蛋白的种类关系不大。2.机体的抗氧化能力与CETP基因多态位点的等位基因D有关,而与等位基因D所表达的产物可能关系不大。3.氧化应激对机体免疫反应有一定的影响作用,在一定条件下可能抑制机体的免疫反应,对机体的免疫反应起到危害作用。
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