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从人类早期胚胎的克隆中提取干细胞(即所谓的“治疗性克隆”),用于使组织再生和器官修复,对于一些重大疾病的治疗有重大意义,也是新药研发的重要工具。从事这方面的研究和最终的临床应用需要大量的人成熟卵细胞,而通过女性捐献卵细胞来开展这方面的工作仍有许多难点。获取人成熟卵细胞面临的困难是广泛开展人类治疗性克隆研究和临床应用的主要障碍。报道的研究发现,从死亡后的人脑组织获得的神经细胞经复苏后能恢复功能,这启示我们:能否从死亡后人卵巢组织获取腔前卵泡,结合目前已经广泛应用的辅助生殖技术——未成熟卵母细胞体外成熟技术(IVM),来培养成熟卵细胞用于“治疗性克隆”的研究和临床应用。本研究针对以上问题,首先使用小鼠死亡后的卵巢组织来模拟人死亡后的卵巢组织进行腔前卵泡的体外成熟培养。
参照文献报道的腔前卵泡的体外成熟培养方法,通过多次试验和改良,最终确定了一个较为简便的成熟培养流程,主要使用琼脂三维(3D)培养基。结果发现从死亡后24小时和48小时小鼠(18日龄)体内获取卵巢,通过机械+酶消化法可获得大量腔前卵泡;体外培养7天后,腔前卵泡的存活率分别为63.6%和53.3%;以第一极体的排出为标志,两组的最终成熟率分别为14.6%和20%。
我们的研究结果提示从小鼠死亡后一定时间内获得未成熟腔前卵泡,经体外培养仍具有发育成熟的能力,这为该技术的进一步发展以及最终应用于人死亡后腔前卵泡的成熟培养奠定了重要基础。