二十二碳六烯酸(docosahexaenic acid, DHA)属于ω-3多不饱和脂肪酸(ω-3polyunsaturated fatty acid, ω-3PUFA),是人体的必需脂肪酸之一。不仅能改善患者营养状况和免疫功能,还具有抗血栓、降血脂、降血压、抗动脉硬化等作用,并对过度的炎症反应有抑制作用。近年来又有实验研究发现,ω-3PUFAs能抑制多种肿瘤的生长、侵袭及转移、延长荷瘤宿主的生存时间,增加化疗药物和放射治疗抑制肿瘤生长的效果,但并不增加化疗药物的毒性。临床恶性肿瘤患者化同时增加DHA等ω-3PUFA的摄入,可以有效减慢肿瘤的生长速度,抑制肿瘤的转移并可使已经形成的转移灶减至消失。胃癌是我国最常见的消化道肿瘤,发病率呈逐年递增趋势,手术仍是目前治疗胃癌的主要方法之一,但术后及肿瘤晚期的病人常伴有营养不良、免疫功能低下、恶病质等问题。DHA不仅在营养支持方面起作用,其单用或联合化疗药物对胃癌细胞还具有抑制杀伤作用,但其作用机制并不十分清楚。本研究拟通过体外细胞试验观察DHA单用及联合顺铂(DDP)对胃癌细胞株的影响和体内动物实验观察两者对胃癌移植瘤和荷瘤裸鼠的作用,进一步检测NF-kBp65、survivin蛋白在胃癌细胞中的表达情况,从而评估其在胃癌治疗中的作用和可能的作用机制,为胃癌的综合治疗提供新的实验室和理论依据。第一部分：DHA联合DDP对胃癌细胞MGC-803凋亡及相关基因表达的影响目的：研究DHA联合DDP对人胃癌MGC-803细胞凋亡及相关基因表达的影响,并初步探讨其机制。方法：MTT法检测DHA及DHA联合DDP对MGC-803细胞的体外增殖抑制作用；并根据中效原理计算DDP的半数抑制浓度即IC50值,概率和法计算Q值并判断两药的作用；倒置显微镜下观察细胞生长状况,DAPI染色荧光显微镜下观察凋亡及形态；FCM检测药物处理后各组细胞周期及细胞早期凋亡率的变化,细胞免疫化学SP法检测对照组、单药组、DHA联合DDP对移植瘤组织survivin、NF-κB蛋白的表达。结果：DHA对MGC-803细胞的增殖有抑制作用,并诱发细胞凋亡,且呈时间和剂量依赖效应(P<0.01)。DHA联合DDP对MGC-803细胞的增殖抑制作用更加明显。DDP48h和72h时IC50分别是4.31μg/mL和2.42μg/mL,合用DHA后下降至2.12μg/mL和0.91μg/mL。同样的,Q均大于0.85,DHA可协同增强DDP作用。倒置显微镜下可见两药联合处理后细胞稀疏；DAPI染色后荧光显微镜下观察出现细胞凋亡的典型特征。且DHA单药组、DDP单药组和联合组的细胞凋亡率依次升高,与对照组相比差异均有统计学意义(P<0.05)；与单药组或对照组相比,联合组G0/G1期细胞增多(P<0.01),DHA、DDP单药组及联合使得进入G2/M及S期的细胞数明显减少,较对照组有明显意义(P=0.01)。各给药组细胞中survivin、NF-κB蛋白的表达水平均低于对照组(P<0.01),其中联合用药组又明显低于各单药组,有统计学意义(P<0.05)。结论：DHA可抑制MGC803细胞的体外增殖,联合DDP后对细胞生长抑制和周期阻滞具有协同作用,可能与下调survivin、NF-κB蛋白的表达诱导细胞凋亡有关。第二部分：DHA协同DDP对胃癌裸鼠移植瘤生长抑制作用及机制的探讨目的：研究DHA与DDP在体外对人胃癌裸鼠移植瘤的影响,二者的联合抗癌效率,探讨DHA和DDP联合抗癌的相关机制。为胃癌综合治疗提供新思路。方法：将28只裸下鼠腋下接种0.2mL(1×106个细胞)人胃腺癌细胞MGC803细胞悬液,建立人胃癌裸鼠移植瘤模型,并随机分成4组：A对照组(腹腔注射生理盐水,2次/w;灌胃,1次/d)、B DHA组(灌胃,2g/kg,1次/d)、C DDP组(腹腔注射,3mg/kg,2次/w)、D联合组(腹腔注射DDP,3mg/kg,2次/w;灌胃DHA,2g/kg,1次/d),共治疗2周。用药过程中,观察裸鼠一般生长状况、体重变化、肿瘤体积和重量变化,于接种后24d处死各组小鼠；FCM检测移植细胞凋亡率的变化；免疫组织化学SP法检测DHA及DHA联合DDP对移植瘤组织survivin、NF-κB蛋白的表达。结果：各组移植瘤体积：对照组(3.25±0.25)cm3,而DHA组(2.32±0.19)cm3,DDP组(1.00±0.08)cm3；联合组(0.50±0.15)cm3,DHA或DDP单药组以及联合用药组的裸鼠移植瘤体积均明显小于对照组,其中联合用药组裸鼠移植瘤体积明显小于DHA或DDP单药组,差异均有统计学意义(P<0.01),且DHA组、DDP组与联合组之间比较亦有统计学意义(P<0.01)。DHA组、DDP组及联合组移植瘤的重量与对照组相比较有明显差异(P<0.01),联合组较DHA组及DDP组明显降低,有明显差异(P=0.001)：联合用药组的肿瘤的生长抑制率84.66%,高于而DHA组28.62%和DDP组69.36%,差异有统计学意义(P<0.01)；应用DDP的小鼠体重丢失严重,加用DHA后有助于保护小鼠体重丢失,改善裸鼠的一般情况；联合组的细胞凋亡率与对照组及单药组相比差异均有统计学意义(P<0.01)。各给药组裸鼠移植瘤组织中survivin、NF-κB蛋白的表达水平均低于对照组(P<0.01),其中联合用药组又明显低于各单药组,有统计学意义(P<0.05)结论：DHA在裸鼠移植瘤模型中运用抑制移植瘤的增长,联合DDP时能增强抑制作用,与单用DDP比较,DHA能防止小鼠体重的严重丢失,作用机制可能与两者联用诱发调亡,下调survivin、NF-κB蛋白的表达有关。