论文部分内容阅读
肝纤维化是一种常见的肝病愈伤反应,它以细胞外基质沉积为特点。在纤维化的过程中,活化的肝星状细胞(hepatic stellate cells, HSC)和转录生长因子-β1(transforming growth factor-β1, TGF-β1)信号途径起重要的作用。大量研究证实,TGF-β-Smad信号转导通路是TGF-β发挥生物学作用的主要通路。近年对TGF-β-Smad信号转导通路的分子组成及其在肝纤维化病程中的作用机理进行了广泛的研究,使肝纤维化的发病机制得到进一步阐明,也为肝纤维化防治带来了新的希望。本文以HSC为对象研究了柚皮素(naringenin)通过TGF-β-Smad信号转导通路抑制细胞外基质产生的作用机理。转录生长因子-β通过Smad的信号转导的基本途径是,配体TGF-β1与I、II型受体结合后,II型受体的激酶区引起I型受体GS区的丝氨酸残基磷酸化而使I型受体活化,活化的I型受体与胞浆内以同源寡聚体存在的R-Smads短暂结合,并使之C-端的SSXS结构域中的丝氨酸残基磷酸化而激活,R-Smads分子迅速与受体解离,与Co-Smads三聚体结合而形成异源六聚体或其它的寡聚体形式后,依赖与核膜上的转运系统而转移至核内,作为转录因子单独或与其它DNA结合蛋白共同激活特定基因的靶序列的转录,生成下游产物如胶原(collagen, Col),纤维连接蛋白(fibronectin, FN),和纤溶酶原激活物抑制剂(plasminogen activator inhibitor, PAI)等。这些都是细胞外基质的主要成分。柚皮素对肝脏的纤维化过程中有明显的抑制作用,在本研究中,首次对其机理进行探讨,使用了肝星状细胞(HSC),并通过RT-PCR和western blot的方法分析验证了柚皮素在HSC中对细胞外基质的抑制效应。得出了以下几个重要结论:(1)柚皮素可以在mRNA水平上降低Smad3的表达,以及Col、FN、PAI等ECM的主要成分的表达。(2)柚皮素可以在蛋白水平上降低Smad3、磷酸化的Smad3的表达,以及以及Col、FN、PAI等ECM的主要成分的表达。(3)柚皮素是通过影响TGF-β-Smad信号途径抑制纤维化的发生的,其作用位点是阻断Smad3。并且是针对Smad3的特异性抑制,对Smad2、Smad4、Smad7没有影响。