黑参为五加科植物人参经过九蒸九晒等炮制工艺加工而成的一种继红参之后的人参新加工炮制品。黑参的主要活性成分是人参皂苷,具有较高的生物活性,如:抗氧化、抗肿瘤、降血糖等。为了探究黑参皂苷的生物活性,采用冻融技术、经过不同阶段发酵蒸制得到黑参。采用乙醇超声法提取皂苷,通过响应面实验优化皂苷的提取工艺并采用大孔树脂纯化皂苷。采用液相质谱联用技术对比人参和黑参的化学成分。探究人参皂苷和黑参皂苷的抗氧化活性以及对胃癌MGC-803细胞的抑制作用及凋亡机制。以此方法制备的黑参,颜色呈黑色、Rg3含量比传统方法高,可作为制备黑参的新方法。以乙醇为溶剂、超声辅助提取黑参皂苷。根据响应面实验优化结果,确定了黑参皂苷的最佳提取工艺:固液比1:39、超声时间78 min、乙醇浓度71%,此时得率为11.73%。将提取的黑参皂苷经D101大孔树脂纯化后,其含量为89.02%。通过LC-MS分析黑参具有14种单体皂苷,其中含有Rg3、Rg5、Compound K等稀有皂苷。推测是由于黑参的制备过程中,普通人参皂苷发生转化而形成的。为了探究人参皂苷和黑参皂苷的抗氧化能力,通过研究人参皂苷与黑参皂苷对DPPH自由基的清除能力,结果显示黑参皂苷在4 mg/m L时对DPPH自由基清除率达到86.01%,人参皂苷为50.63%。在对羟自由基清除率方面,在4 mg/m L时黑参皂苷达77.9%,人参皂苷为44.8%。黑参皂苷的抗氧化能力比人参皂苷强。本课题研究了黑参皂苷对胃癌MGC-803细胞凋亡的影响,进行了MTT、形态观察、流式细胞术、WB实验。MTT法显示人参皂苷24 h的IC50为296.64μg/m L,48 h的IC50为266.46μg/m L,72 h的IC50为188.35μg/m L,黑参皂苷24 h的IC50为141.25μg/m L,48 h的IC50为120.23μg/m L,72 h的IC50为95.5μg/m L。说明黑参的抗肿瘤作用比人参皂苷强。通过倒置显微镜和荧光显微镜发现经黑参皂苷处理过的胃癌MGC-803细胞出现凋亡特征。流式细胞术结果表明细胞总凋亡率由0.23%增长到66.96%。细胞周期结果显示G0/G1期比例由62.51%变化到96.19%,S期由37%降低到3.14%,G2/M期细胞无明显变化,因此可以推断细胞阻滞在G0/G1,细胞分裂受到抑制。线粒体膜电位下降至23.45%,ROS水平升高至74.65%。WB结果显示Bax,Cyt-C,Caspase3、Caspase9的表达增加达到1.18、1.08、1.16、1.32倍,Bcl-2的表达量降低了1.03倍。其凋亡机制主要是通过Bax、Bcl-2等蛋白表达的改变,导致线粒体膜电位下降,Cyt-C,Caspase3、Caspase9被激活而裂解,使胃癌MGC-803细胞凋亡。