全世界大约有3亿5千万乙型肝炎病毒携带者，这种感染者集中分布于东南亚、东亚及非洲的撒哈拉地区。HBV的持续存在常可导致肝硬化以及肝癌。而且对于已感染者，免疫疗法通常无效。 乙型肝炎病毒是一小的DNA病毒，其复制过程需要经过RNA的生物合成阶段。HBV C基因表达的C蛋白（HBeAg，HBcAg）参与病毒核衣壳的装配是免疫攻击的靶抗原，因此剪切C区基因mRNA既可抑制HBV的复制，又可阻断HBcAg的表达。由于锤头型核酶具有分子小，可序列特异性地切割靶RNA的特点，所以可用它切割HBV C基因的RNA，阻断HBV基因的复制和表达。本研究用多位点核酶观察其对细胞内及荷瘤裸鼠中HBV的mRNA的切割作用。 利用我们已经设计并应用过的抗HBV C区基因的核酶的二级结构，设计将锤状核酶的必需碱基突变。构建突变核酶的体外转录质粒，体外转录结果表明突变核酶的自剪切体外转录质粒在5’和3’顺式核酶发生自剪切后，可正确地将目的核酶释放出来。体外切割实验表明：多位点核酶可切割靶RNA的不同位点。而突变的核酶对靶RNA无切割作用。将多位点核酶及突变核酶构建5个不同的真核表达载体，与含HBV全基因的质粒p1.2Ⅱ共转染HepG2细胞。结果 祭 口 军 召 九 号 丙 亡 住丈 — — 表明，筛选的HepGZ细胞可表达抗HBV的串联型核酶及突变核酶。 不同的载体表达核酶对HBeAg的抑制率不同，PDCTRZA－Rzl23的抑 制率最高，可达 sl引说明聚合酶＊转录系统作为启动子可以促使 核酶在细胞内高水平表达。 构建核酶的腺病毒表达载体，转染293细胞，用空斑技术筛选 重组腺病毒。扩增后，感染2．2．15细胞，结果表明，核酶对2．2．15 细胞中的 HBeAq表达有明显抑制，抑制率 8 7．l引免疫组化及激光 共聚焦证实了上述观点。 用重组腺病毒感染荷瘤裸鼠中的含HBV基因的瘤细胞，证实亦 可抑制瘤细胞中的HBV基因表达。 构建含荧光蛋白的真核表达载体，转染HepGZ细胞后，原位证 实细胞内可表达核酶，经皮下、静脉注射＊、鼠，发现＊、鼠肌肉及肝 脏细胞中亦可表达核酶。