【摘 要】
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目的探讨逆转录病毒介导的靶向人乳头瘤病毒(human papillomavirus,HPV)16 E6基因的小干扰RNA(small interfering RNA,siRNA)(即HPV16 E6-siRNA)对HPV16阳性宫颈癌SiHa细胞的
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目的探讨逆转录病毒介导的靶向人乳头瘤病毒(human papillomavirus,HPV)16 E6基因的小干扰RNA(small interfering RNA,siRNA)(即HPV16 E6-siRNA)对HPV16阳性宫颈癌SiHa细胞的影响。方法1、收集产逆转录病毒PA317细胞的病毒上清液感染靶细胞SiHa,G418筛选获得HPV16 E6基因稳定沉默的细胞克隆(SiHa/16E6),同时设立载体对照(SiHa/pSUPER)和正常细胞对照(SiHa);2、RT-PCR检测HPV16 E6和E7 mRNA的水平;3、Western印迹法检测p53、Rb、caspase 3和PARP蛋白的表达;4、四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法检测细胞的增殖活性及细胞对顺铂的敏感性。结果与SiHa细胞对照组相比,感染后各时间点E6和E7 mRNA表达水平均有所下降,p53和Rb蛋白表达水平增高,caspase-3和PARP剪切后的活性条带增加;感染后40d细胞的增殖活性下降;在同一药物浓度下,感染后20d细胞存活率显著降低,顺铂的IC50值为3.92±2.48μg/ml。而SiHa/pSUPER组与SiHa细胞对照组相比,差异无统计学意义。结论逆转录病毒介导的HPV16 E6-siRNA可有效沉默SiHa细胞E6和E7基因的表达,抑制细胞增殖,诱导细胞凋亡并提高细胞对顺铂的敏感性。
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