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鸭肌纤维的生长发育情况与鸭肉品质性状密切相关,在肌纤维的形成以及生长发育过程中,Pax3、DCN和MSTN基因对骨骼肌的生理特性起到决定性作用。为进一步了解Pax3、DCN和MSTN基因与雷州黑鸭骨骼肌形成的密切关系,以及在骨骼肌形成过程中相互之间的功能联系,为改善雷州黑鸭肉品质打下分子基础。本研究对雷州黑鸭第8、13、18、23、28天胚胎的胸肌和腿肌进行组织切片观察,并采用QRT-PCR与western-blot试验方法检测了Pax3、DCN和MSTN基因在以上各阶段胸腿肌中mRNA与蛋白的发育性表达情况。同时用QRT-PCR法检测了雷州黑鸭28胚龄时Pax3、DCN和MSTN基因在心、肝、脾、肺、肌胃、小肠、脑、胸肌、腿肌中mRNA的差异性表达量。本研究采用了RT-PCR法对雷州黑鸭DCN基因序列的CDS区全长进行了克隆,并构建了pcDNA3.1myc-His(-)A-DCN真核表达载体。研究结果表明:(1)从不同胚胎期的胸肌、腿肌组织切片可见,胚胎发育过程中雷州黑鸭骨骼肌的形成经历了成肌细胞,多核肌管,肌纤维形成的过程。雷州黑鸭胚胎期腿肌的发育明显早于胸肌,且腿肌为早熟部位,胸肌为晚熟部位。(2)本研究采用荧光定量PCR的方法,对胚胎期雷州黑鸭Pax3基因在骨骼肌中的时空性差异性表达进行检测。结果表明,在不同胚胎期胸肌组织中,Pax3基因mRNA表达水平在23d时达到高峰,在18d时表达量最少;在腿肌组织中Pax3基因mRNA表达水平均在28d时达到高峰,在18d时表达量最少;在28胚龄期的雷州黑鸭内脏组织中,Pax3基因在腿肌中的表达水平最高,在脾脏中第二,紧接着是胸肌。并采用western-blot的方法,对Pax3基因在雷州黑鸭胚不同胚胎期的胸肌、腿肌组织中蛋白表达水平进行检测,结果表明,在胸肌组织中,Pax3蛋白在23胚龄时表达量最高,13胚龄时最低;在腿肌组织中28胚龄时表达量最高,8胚龄时表达量最低。(3)胚胎期雷州黑鸭DCN基因在骨骼肌中的时空性差异性表达进行检测。结果表明,在不同胚胎期胸肌组织中,DCN基因mRNA表达水平在28d时达到高峰,在8d时表达量最少;在腿肌组织中DCN基因mRNA表达水平均在28d时达到高峰,在8d时表达量最少;在28胚龄雷州黑鸭内脏组织中,DCN基因在胸肌中的表达量第一,第二是腿肌。并采用western-blot的方法,对DCN基因在雷州黑鸭胚不同胚胎期的胸肌、腿肌组织中蛋白表达水平进行检测,结果表明,DCN蛋白在胸肌组织中23胚龄表达量达最高,在13胚龄时最低;在腿肌组织中28胚龄时表达量最高,8胚龄时表达量最低。(4)本研究采用荧光定量PCR的方法,对胚胎期雷州黑鸭MSTN基因在骨骼肌中的时空性差异性表达进行检测。结果表明,在不同胚胎期胸肌组织中,MSTN基因mRNA表达水平在23d时达到高峰,在8d时表达量最少;在腿肌组织中MSTN基因mRNA表达水平在28d时最高,在13d时表达量处于最低谷;在28胚龄雷州黑鸭内脏组织中,MSTN基因在腿肌中的表达量最高,第二是胸肌。并采用western-blot的方法,对MSTN基因在雷州黑鸭胚不同胚胎期的胸肌、腿肌组织中蛋白表达水平进行检测,结果表明,MSTN蛋白在胸肌组织中23胚龄时表达量达最高,8胚龄时最低;在腿肌组织中28胚龄时表达量最高,8胚龄时表达量最低。(5)本研究成功的克隆雷州黑鸭DCN基因CDS区全长,并通过生物信息学分析发现,雷州黑鸭的DCN基因与鸡的遗传距离最近。对DCN蛋白质结构进行预测时,发现雷州黑鸭DCN蛋白不存在跨膜结构,有1处信号肽位点,该蛋白不是分泌型通路信号肽,其氨基酸序列为亲水性,有13个磷酸化位点和2个N-糖基化位点。DCN蛋白包含有3个LRR8、1个富含亮氨酸重复N端结构域和1个属于核糖核酸酶抑制剂的亚家族的富含亮氨酸重复序列,参与胚胎期骨骼肌的形成调控;并且对DCN真核表达载体pcDNA3.1myc-His(-)A-DCN进行了构建。