呼吸道病毒是一组能够通过呼吸道引起呼吸系统或及其他系统疾病的病毒病原。呼吸道病毒的传播方式决定了容易引发大流行如流感病毒和SARS病毒感染，对这类病毒的快速检测对于采取有效的防范和治疗措施极为重要。本研究首先建立了重要呼吸道病毒病原的多重PCR检测方法。多重PCR是在同一反应管中完成多个不同的基因扩增反应，可快速同时检测多种病毒。呼吸道病毒种类众多，且临床症状相似，多重PCR技术适于此类病毒的检测。本研究首先建立了可检测三种重要的呼吸道病毒，即甲型流感病毒（IA）、呼吸道合胞病毒（RSV）和SARS冠状病毒（SARS-CoV）的多重PCR方法。敏感性分别为10^1.7TCID₅₀／ml、10TCID₅₀／ml和10^1.5TCID₅₀／ml。与此同时还建立了可检测三种重要致呼吸系统疾病的2、3和7血清型腺病毒的多重PCR方法，敏感性为0.01～1TCID₅₀／ml。本研究所建立的多重PCR方法可在6小时内完成，适用于待检主要呼吸道病毒的快速甄别。实时定量PCR具有快速，减少污染和准确定量的优点，和多重PCR相结合不仅能够快速同时检测多种病毒，而且由于减少了酶和荧光染料或探针的使用量更降低了检测成本。本研究针对多重PCR检测的IA、RSV和SARS-CoV，采用SYBR GREENⅠ荧光染料法进行多重实时定量PCR检测。敏感性分别为10^0.7TCID₅₀／ml、1TCID₅₀／ml和10^-0.5TCID₅₀／ml，敏感性总体上高于普通多重PCR，而与普通多重PCR具有同样良好的特异性。SARS-CoV的实验室检测需在BSL-3级生物安全实验室中进行。本研究建立了基于重组、克隆表达特异抗原的SARS-CoV间接免疫荧光（IFA）检测方法。通过获得可稳定表达SARS-CoV N蛋白的重组细胞系，采用IFA方法对SARS-CoV感染的血清标本进行检测，从而避免可能由该病毒引起的实验室感染或由于缺乏BSL-3级生物安全实验室而造成的检测条件限制。同时，通过制备抗原片，可在3小时内在免疫荧光显微镜下观察结果，从而为快速、安全检测SARS-CoV感染提供了有效手段。