论文部分内容阅读
第一部分大鼠肺源性内毒素肺损伤模型的建立目的观察经气管滴入不同剂量内毒素对大鼠肺炎性改变的影响,探讨肺源性内毒素诱发肺损伤的病理生理变化,为后续研究提供依据。方法清洁级成年雄性SD大鼠36只,随机分为6组:对照组(C组,n=6)、50μg/kg内毒素组(L1组,n=6)、100μg/kg内毒素组(L2组,n=6)、200μg/kg内毒素组(L3组,n=6)、1000μg/kg内毒素组(L4组,n=6)和5000μg/kg内毒素组(L5组,n=6)。内毒素经由气管滴入,呼吸空气。实验3小时结束,放血处死大鼠。测定大鼠肺损伤评分、肺组织湿/干重比(W/D)、支气管灌洗液(BALF)白细胞计数、血管透性系数。酶联免疫分析法(ELISA法)测灌洗液里肿瘤坏死因子-α(TNF-α)及巨噬细胞炎性蛋白-2(MIP-2)浓度。结果肺损伤评分、W/D和血管透性系数:与C组比较,L1、L2和L3组变化无统计学意义, L4和L5组各项指标均升高(P<0.05或P<0.01);与L4组比,L5组各项指标升高均有统计学意义(P<0.05或P<0.01)。肺灌洗液里WBC:与C组比较,L1和L2组变化无统计学意义,L3组升高(P<0.05),L4和L5组显著升高(P<0.01)。肺灌洗液里TNF-α浓度:R组没检测到,L1、L2、L3组测到少量,L4和L5组比L1增多有统计学意义。灌洗液里的MIP-2浓度:C、L1、L2、L3组量很少,L4组升高,L5组明显升高。结论经气管滴入50-100μg/kg LPS不会导致大鼠肺结构损伤和炎性细胞浸润,但能引起TNF-α轻度升高;经气管滴入200μg/kg LPS不导致大鼠肺结构损伤,但有轻度炎性细胞浸润和TNF-α轻度升高;经气管滴入1000和5000μg/kg LPS则导致大鼠肺结构损伤和炎性细胞浸润,伴有TNF-α和MIP-2升高,PO2降低。第二部分不同通气方式对大鼠肺及肺内毒素受体CD14的影响目的观察不同的机械通气方式对大鼠肺及肺内毒素受体CD14的影响。方法24只成年雄性SD大鼠采用3%戊巴比妥35-40mg/kg腹腔注射麻醉后,行气管切开并置入气管导管固定,将之随机分为4组(n=6):自主呼吸组(R组);机械通气组(M组),潮气量(VT)=12ml/kg,呼气末正压(PEEP)=0mmHg;保护性机械通气组(P组),潮气量VT=6ml/kg,呼气末正压PEEP=8mmHg;大潮气量机械通气组(N组),VT=40ml/kg,PEEP=0 mmHg。吸呼比1:1,根据PETCO2和血气结果调整呼吸频率(RR)。右颈动脉置管测血压并取血测血气,左股静脉置管输液给药。分别于机械通气前(基础值)、机械通气60、120、180min行动脉血气分析,实验3小时结束,放血处死大鼠。测定大鼠肺损伤评分、肺组织湿/干重比(W/D)、支气管灌洗液(BALF)炎性细胞计数、血管透性系数(LPI)。酶联免疫分析法(ELISA)法测BALF里肿瘤坏死因子α(TNF-α),及巨噬细胞炎性蛋白2(MIP-2)浓度。RT-PCR测肺组织内毒素受体CD14的表达,免疫组化法测肺组织的CD14表达。结果肺损伤评分:R组和P组无变化,M组有轻度升高,N组比M组明显升高( P<0.01)。肺W/D:与R组比较,P组和M组无统计学差异; N组升高(p<0.01)。LPI:与R组比较,P组和M组差别无统计学意义;N组明显升高(P<0.01)。BALF中WBC:与P组无显著变化,M组升高(P<0.05),N组显著升高(P<0.001)。TNF-α在四组都没测到。MIP-2,与R组比较,P组差别无统计学意义, M组升高(P<0.05),N组明显升高(P<0.01)。肺组织CD14基因和蛋白表达:与R组比较,P组差别无统计学意义;M组蛋白表达差别无显著意义,但基因表达升高;N组二者表达都显著升高(P<0.01)。结论常规机械通气导致大鼠肺部发生轻度损伤,并可使肺部CD14基因表达上调,但是肺部CD14蛋白表达无明显改变;大潮气量机械通气导致大鼠肺部损伤,使肺部CD14表达明显上调。保护性机械通气可使大鼠肺部避免上述改变的发生。第三部分不同潮气量机械通气对大鼠肺泡巨噬细胞的影响目的观察不同潮气量的机械通气对大鼠肺泡巨噬细胞和肺泡巨噬细胞CD14的影响。方法清洁级成年雄性SD大鼠18只,随机分为3组:自主呼吸组(C组,n=6),保护性机械通气组(P组,n=6),潮气量(VT)=6ml/kg,呼气末正压(PEEP)=8mmHg;和大潮气量机械通气组(N组,n=6),VT=40ml/kg,PEEP=0 mmHg。吸呼比1:1,根据PETCO2和血气结果调整呼吸频率(RR)。右颈动脉置管测血压并取血测血气,左股静脉置管输液给药。分别于机械通气前(基础值)、机械通气60、120、180min行动脉血气分析,实验3小时结束,放血处死大鼠。测定大鼠肺损伤评分、肺组织湿/干重比(W/D)、支气管灌洗液(BALF)炎性细胞和肺泡巨噬细胞(AM)计数、蛋白透性系数(LPI)。酶联免疫分析法(ELISA法)测AM培养液里单核细胞趋化蛋白(MCP-1)及巨噬细胞炎性蛋白-2(MIP-2)浓度。RT-PCR测AM内毒素受体CD14的表达,免疫组化法测AM上CD14表达。结果肺损伤评分、W/D、BALF里WBC和AM、LPI、CD14基因和蛋白表达及培养液里MCP-1和MIP-2浓度:与C组比较,P组无显著改变,N组升高有显著性差异(P<0.01)。结论大潮气量机械通气大潮气量机械通气激活了肺泡巨噬细胞,导致巨噬细胞募集到肺泡并使肺泡巨噬细胞表达CD14上调;保护性机械通气对肺泡巨噬细胞无明显影响。第四部分肺源性内毒素对大鼠机械通气肺损伤的影响及机制目的观察经气管滴入LPS对机械通气大鼠肺损伤的影响并探讨其可能机制。方法成年雄性SD大鼠24只,随机分为自然呼吸组(C组,n=6)、内毒素加自然呼吸组(C1组,n=6)、机械通气组(M组,n=6)和内毒素加机械通气组(M1组,n=6)。C1组和M1组经气管滴入100μg/kg LPS,M组和M1组接小动物呼吸机行机械通气。呼吸参数设定:潮气量(VT)=20ml/kg,PEEP=0mmHg,吸/呼为1:1,调节呼吸频率(RR)使PETCO2维持在35-45mmHg。C组和C1组保持自主呼吸。四组都吸入空气。监测动物血压、心率、心电图和PET CO2。实验开始、60min、120min和180min测血气。整个实验严格执行无菌操作。实验3h结束,放血处死大鼠。测定大鼠肺损伤评分、肺组织湿/干重比(W/D)、支气管灌洗液(BALF)炎性细胞数和肺泡巨噬细胞数(AM)、肺蛋白透性系数。酶联免疫分析法(ELISA法)测BALF里肿瘤坏死因子-α(TNF-α)及巨噬细胞炎性蛋白-2(MIP-2)浓度。RT-PCR法测肺组织内毒素受体CD14 mRNA的表达,免疫组化法测BALF里巨噬细胞的CD14表达。结果肺W/D和肺蛋白透性系数:与C组比, C1组和M组无统计学意义(P>0.05),M1组升高(P<0.01);与M组比,M1组升高(P<0.01)。BALF中WBC和AM、病理学积分和MIP-2:与C组比, C1组无明显改变,M组和M1组升高(P<0.01);与M组比,M1组升高(P<0.01)。TNF-α:C组和M组未检测到, C1组和M1组升高,M1组比C1组升高更显著(P<0.01)。肺组织CD14基因表达和BALF里巨噬细胞的CD14:M组比C组升高(P<0.01)。结论微量肺源性内毒素能加重机械通气肺损伤。微量肺源性内毒素加重机械通气肺损伤的部分机制可能是由于机械通气导致肺泡巨噬细胞增加和肺内毒素受体CD14表达上调,增加了肺对内毒素的敏感性所致。