论文部分内容阅读
罗布麻(Apocynum venetum Linn)是我国的传统中药,其叶具有降血压、降血脂、肝保护和抗抑郁等活性。现如今,有关罗布麻叶的文献报道近20篇,主要集中在多酚类及糖苷类,尚缺乏对罗布麻叶多糖的分离纯化、结构分析和生物活性的报道。本文对罗布麻叶多糖进行了系统的分离纯化,进一步研究了各级分的单糖组成,理化性质及分子量,并对获得的均一多糖级分的结构特征进行了详细的分析。干燥的罗布麻叶经过热水煮提、乙醇沉淀和Sevag法脱蛋白得到罗布麻叶水溶性粗多糖ALP(5.8%),其单糖组成为甘露糖、鼠李糖、葡萄糖醛酸、半乳糖醛酸、葡萄糖、半乳糖和阿拉伯糖,摩尔比为0.29:1.0:0.55:3.88:1.12:2.20:1.29。ALP经过DEAE-Cellulose柱层析分级,得到一个中性糖级分ALPN和两个酸性糖级分ALPA-1和ALPA-2。这三个级分均进行了含量、组成以及分子量的分析。ALPA-1和ALPA-2进一步通过Sepharose CL-6B分级得到两个较均一的级分ALPA-1a和ALPA-2a。通过凝胶渗透色谱和高效液相色谱验证ALPA-1a和ALPA-2a两者为均一的多糖级分,ALPA-1a主要由半乳糖(37.55%)、阿拉伯糖(36.92%)、鼠李糖(9.93%)及半乳糖醛酸(8.2%)组成,其分子量为5.0×104 Da,半乳糖和阿拉伯糖占总糖的50%以上,同时Rha/GalA和Gal/Ara均接近1:1。利用13C核磁共振分析发现,ALPA-1a是以α-D-GalpA-(1,2)-α-L-Rhap为主链,带有阿拉伯半乳聚糖侧链的多糖,推测其为I型聚鼠李半乳糖醛酸(RG-I)果胶。而ALPA-2a主要由鼠李糖(7.38%)、半乳糖醛酸(67.29%)、葡萄糖(8.29%)、半乳糖(7.07%)和阿拉伯糖(5.43%)组成,其中半乳糖醛酸的比例占总糖的70%左右,其分子量为1.8×104 Da。应用红外光谱、高碘酸氧化、Smith降解、部分酸水解和13C核磁共振波谱法(13C NMR)对ALPA-2a进行结构分析。研究发现,ALPA-2a中的半乳糖醛酸主要以α-D-(1,4)连接构成主链,还有少量鼠李糖以(1,2)连接方式连接在侧链,同时,侧链的Ara和Gal以arabino-(3,6)-galactan方式连接。根据结果推测:ALPA-2a为富含有聚半乳糖醛酸(HG)结构域的果胶类多糖,并带有少量的RG-I型结构域。在血细胞凝集阻抑实验中,ALPA-1b和ALPA-2a表现出明显的抑制血细胞凝集的活性,即这两个HG型果胶级分与半乳凝集素-3(Galectin-3)有很强的结合能力。此外,RG-I型果胶级分ALPA-1a与Galectin-3也具有较强的结合能力,而AG型果胶级分ALPN与Galectin-3几乎没有结合能力。比较各级分的结构特征,我们推测:从罗布麻叶分离得到的果胶中HG型结构级分与Galectin-3的结合能力强于RG-I型级分,而具AG型结构的果胶级分几乎不与Galectin-3结合,这可能是由于HG型果胶本身的空间结构或其上的半乳糖的连接方式、空间位置更适合与Galectin-3结合的缘故。