论文部分内容阅读
采后病原真菌引起的果蔬腐烂会导致巨大的经济损失。目前,化学合成杀菌剂是控制果蔬采后病害的主要方法。但是化学合成杀菌剂具有致癌、致畸性、残留量大、污染环境且易使病原菌产生抗药性等缺点,不宜长期使用。因此,开发一种安全、有效、且不污染环境的天然杀菌剂替代化学合成杀菌剂成为目前的研究热点。植物精油作为植物次生代谢物质,具有较强的抑菌活性、低毒、环境友好等特点,引起学者的广泛关注。香茅精油是从香茅草中提取,具有较强的抑菌作用的精油,目前关于香茅精油控制樱桃番茄主要采后病害的研究少有报道。本论文系统研究了香茅精油对樱桃番茄主要采后病原菌——灰葡萄孢菌和链格孢菌的抑菌作用并对其防治机理进行了初探。主要研究结果如下: 1.三种植物精油在樱桃番茄体外和体内的筛选试验 通过体外熏蒸和直接接触两种方式对三种植物精油进行了体外及体内试验,研究其对樱桃番茄主要采后病原菌的抑制作用。结果表明,香茅精油在体外和体内试验中均表现出最强的抑菌作用。在体外直接接触方式下,香茅精油浓度为1.5μl/ml时,完全抑制灰葡萄孢和链格孢菌丝生长。在体外熏蒸方式下,在香茅精油添加量为15μl时,对灰葡萄孢和链格孢的抑菌率分别为84.56%和80.39%。在樱桃番茄体内试验时,在香茅精油浓度为1.5μl/ml时,其抑制灰霉病和黑腐病发病率50.33%和61.03%。 2.香茅精油对樱桃番茄主要病原菌体外抑制及其在PDA条件下MIC的确定 将不同浓度香茅精油在PDA培养基条件下通过直接接触和熏蒸方式抑制灰葡萄孢和链格孢菌丝的生长。结果表明:香茅精油的抑菌效果随精油浓度的增加而增加。在直接接触方式下,精油浓度分别为1.5μl/ml和1.0μl/ml时,可以完全抑制灰葡萄孢和链格孢菌丝的生长;在熏蒸方式下,精油添加量为15μl时,对灰葡萄孢和链格孢的抑制率分别为92.94%和100%。 3.香茅精油对灰葡萄孢及链格孢孢子萌发、在PDB培养基条件下菌丝生物量的影响及MIC的测定 将不同浓度香茅精油在PDB条件下处理灰葡萄孢及链格孢,测定其孢子萌发率和菌丝生物量。结果表明:香茅精油可以显著抑制两种菌的孢子萌发及菌丝的生长。在精油浓度为0.8μl/ml时,完全抑制灰葡萄孢孢子萌发;在精油浓度1.5μl/ml时,链格孢孢子萌发率为92.48%。另外,香茅精油对两种菌的菌丝生物量有显著影响,在精油浓度为1.2μl/ml时,灰葡萄孢菌丝生物量为0,即完全抑制其菌丝生长;在浓度为1.0μl/ml时,灰葡萄孢菌丝湿重及干重仅为0.3g和19.4mg。在精油浓度为0.8μl/ml时,链格孢菌丝生物量为0,即完全抑制其菌丝生长;在浓度0.6μl/ml时,接种后第10d的菌丝湿重及干重为0.34g和8.63mg。可知,香茅精油对灰葡萄孢和链格孢在PDB条件下的MIC分别为1.2μl/ml和0.8μl/ml。 4.香茅精油对樱桃番茄灰霉病和黑腐病发病率的抑制及其对水果品质的影响 用不同浓度香茅精油进行樱桃番茄体内抑制灰葡萄孢和链格孢试验。结果表明:香茅精油能够有效抑制樱桃番茄灰霉病及黑腐病,其最佳抑菌浓度分别为0.9μl/ml和1.5μl/ml。另外,本试验通过测定香茅精油对樱桃番茄的重量损失、硬度、可溶性固形物和可滴定酸度四个指标,结果表明香茅精油对樱桃番茄水果品质没有任何负面影响。 5.香茅精油对灰葡萄孢及链格孢抑菌机理的初探 香茅精油处理两种菌后,用扫描电镜观察其菌丝的微观结构,并研究精油对菌内DNA和蛋白质含量的影响。结果表明:扫描电镜结果显示对照组菌丝健康饱满,表面平整光滑,香茅精油处理后的菌丝变形并伴有表面凹陷、褶皱、粗糙、不平整现象,其中链格孢菌丝还有孢子缺失现象产生。另外,处理后的病原菌细胞外渗率显著升高,未检测到病原菌核酸泄露现象,且琼脂糖凝胶电泳结果显示对照组和处理组菌内DNA总量没有显著差异,而检测到菌内蛋白质含量显著降低。推测香茅精油抑制病原菌的主要机理在于破坏了病原菌细胞膜,使菌体蛋白质等物质泄露。 6.香茅精油成分分析 用GC-MS对香茅精油成分进行了鉴定,共检测出23种化合物,占总成分的96.68%,这些成分包括单烯萜(75.38%)和倍半萜(21.30%),主要成分为香茅醛(26.23%)、香叶醇(19.75%)、香茅醇(12.96%)及其他化合物。推断其主要抑菌作用的物质是香茅醛、香叶醇和香茅醇。 综上所述,香茅精油对于樱桃番茄主要病原菌灰葡萄孢和链格孢具有较强的抑制作用,并对水果品质没有任何负面影响,因而将其应用于樱桃番茄采后病害的防治具有一定的可行性。