论文部分内容阅读
鬼灯檠（Rodgersia aesculifolia Batal．）又名七叶鬼灯檠，系虎耳草科（Saxifraceae）鬼灯檠属植物，具有清热解毒、止血、止泻等功用，民间作为草药应用，涉及治疗范围较宽。本试验分别采用索氏提取法、超声提取法、超声协同水蒸气蒸馏法、超临界CO2提取法和微波辅助提取法，提取鬼灯檠根茎挥发性成分，进行GC—MS分析，并对几种提取方法进行比较。本论文包括综述和研究报告两部分内容。第一部分：综述鬼灯檠（Rodgersia aesculifolia Batal．）又名七叶鬼灯檠，系虎耳草科（Saxifraceae）鬼灯檠属植物，民间作为草药应用，涉及治疗范围较宽。现代药理学试验研究证明鬼灯檠具有：（1）活血调经，去风湿作用；（2）清热解毒、止血、止泻等功用；（3）抗病毒作用，直接抑制或间接抑制DNA病毒和RNA等病毒；（4）抗菌作用，对金黄色葡萄球菌、绿脓杆菌、大肠杆菌、福氏痢疾杆菌均有抑制作用，对肺炎克雷伯、胸膜肺炎杆菌、小麦赤霉病菌、玉米大斑病菌和辣椒疫霉病菌菌丝的生长等有一定抑制作用；（5）免疫增强作用。另外，临床研究表明，鬼灯檠制剂对痢疾、腹泻、慢性支气管炎、慢性胃炎，甲状腺疾病和风湿性关节炎有很好的疗效。中药作用的基础是其化学物质组成。利用现代科技，阐明中药化学物质基础，色谱联用技术集成了色谱和结构鉴定的光谱手段之优点，是当前最为引人注目的一种新型分析手段，对于中药这样复杂混合物的分析具有十分重要的意义。在色谱—质谱联用技术中，其中气相色谱—质谱（gas chromatography-mass spectrometry，GC-MS）联用技术最为成功、成熟因而成为复杂未知混合物分析的有效手段。本论文将在第一部分做一简单概述。天然有机化合物的提取方法很多，按形成的先后可分为经典提取方法和现代提取方法。经典提取方法由于提取时间长，或效率低，或溶剂用量大，或操作繁琐，或不利于热不稳定成分的提取等局限性，迫切须要新的提取分离技术满足中药现代化的发展。现代提取方法是以现代先进的仪器为基础或新发展起来的提取方法，近年来在某些方面已经代替了传统的提取方法。本章将对本实验所涉及的各种提取方法原理、提取装置和提取过程以及在中草药和天然产物有效成分提取应用作以概述。第二部分：研究报告分为五个部分：鬼灯檠根茎乙醚索氏提取及GC-MS定性分析；鬼灯檠根茎乙醚超声提取及GC-MS分析；超声协同水蒸气蒸馏提取及GC-MS分析；超临界CO2提取及GC-MS分析；鬼灯檠微波辅助提取及GC-MS分析，主要内容为：1．通过选取色谱柱、进样口温度、分流比、程序升温的设计建立最佳测定鬼灯檠根茎挥发性成分的GC-MS条件，具体条件为：选择弱极性的Rtx?-5MS5％dipheny-95％dimethylpolysiloxane（0.25 mm×30.0 m，0.25μm）弹性石英毛细管柱色谱柱分析鬼灯檠提取物成分，程序升温如下，80℃（?）90℃（?）190℃（?）200℃（?）280℃最后在280℃保持4 min；进样口温度为250℃，选择分流比为1：40。按照此条件对鬼灯檠根茎乙醚索氏提取物进行分离和分析。提取得到0.2948 g黄色油状液体，产率为2.95％，共鉴定出46个化合物，以面积归一化测定其相对含量，其中成分有棕榈酸（15.27％）、油酸（14.90％）、亚油酸（9，12-（Z，Z）-十八碳二烯酸）（15.35％）、硬脂肪酸（4.36％）、4-烯-3-豆甾酮（4.33％）和二十八烷烃（3.38％）等。2．按照一定的料液比和提取时间，在一定的样品量、料液比和提取时间条件下，对干燥的鬼灯檠根茎分别进行超声提取、超声协同水蒸气蒸馏提取、超临界CO2提取和微波辅助提取。各种提取方法所得的提取物经过一定样品前处理后，分别得到0.2108g，0.1796g，1.5386g，0.9530g油状提取物液体，其中各种提取方法各自产率为8.78％，1.07％，15.39％，6.35％。3．按照上述已建立好的GC-MS分析条件，对鬼灯檠根茎不同方法的提取物进行分离和分析，得到不同提取物各自总离子流色谱图（TIC），各色谱峰相应的质谱图经人工解析及NIST27和NIST147谱库检索，按各色谱峰的质谱碎片图与文献核对，查对有关质谱资料，对基峰、质荷比和相对丰度等方面进行直观比较，确定其化学成分，索氏提取物、超声提取物、超声协同水蒸气蒸馏提取物、超临界CO2提取物和微波辅助提取物，各自鉴定出46，48，44，45和40种化合物，并用面积归一化法，测定出其相对含量。不同提取方法的提取物主要化合物类别基本一致，都为脂肪酸和烷烃类化合物。其中在脂肪酸提取选择性上，微波辅助提取具有明显的优势；超临界CO2提取，可以提取鬼灯檠根茎中含有少量的萜类化合物、酯类化合物和芳香族化合物；另外，有害物质—邻苯二酸酯类化合物的提取，超临界CO2具有明显的专属性，为检测药材质量控制和用药安全性提供可靠的数据。