山羊支原体山羊肺炎亚种感染机体的免疫应答特征研究

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山羊传染性胸膜肺炎(Contagious caprine pleuropneumonia,CCPP)又称“烂肺病”,是一种高度接触性、危害严重的山羊传染病。该病最早的记载见于1889年Hutcheon的报道,现在则流行于我国以及中东、西亚和非洲的各个养羊国家。CCPP临床表现多为发热、呼吸困难、胸膜肺炎、胸膜炎,造成重大经济损失,严重影响我国养羊业的发展。CCPP的病原为山羊支原体山羊肺炎亚种(Mycoplasmacapricolum subsp.capripeumoniae,Mccp),弄清Mccp感染后机体的免疫反应特点,对设计和研发新型CCPP疫苗具有重要的指导意义。机体对支原体感染的免疫反应不仅仅局限于体液免疫,细胞免疫也是重要方面,但目前国内外关于Mccp感染山羊后的免疫反应特点的研究资料很少。本研究借鉴其他支原体的研究进展,以Mccp感染山羊为研究对象,用ELISA、流式细胞术等方法测定Mccp感染后血清抗体和细胞因子水平、PBMC增殖、细胞凋亡和T细胞亚群CD4+/CD8+的变化。5只健康山羊实验室感染Mccp,于感染0d、感染后第1 d、11 d、18 d、25 d、32 d,采取全血样品分离血清和PBMC,通过本实验室建立的间接ELISA方法检测山羊Mccp感染后不同时间的血清中的抗体水平;通过商品化试剂盒检测血清中细胞因子IL-6、IL-10、IL-4、IL-1β、INF-γ变化情况;通过CCK-8法检测Mccp刺激后PBMC细胞的增殖能力;利用流式细胞术检测PBMC细胞凋亡情况以及T细胞亚群;通过血清抗体水平、细胞因子、PBMC细胞增殖及凋亡和T细胞亚群等检测,分析Mccp感染后机体的免疫反应特点为深入了解Mccp感染免疫反应奠定一定基础。实验结果表明:山羊感染Mccp 11 d时,血清中的抗体全部都转为阳性且达到峰值,提示Mccp感染可引起急性体液免疫反应;山羊感染11 d以后血清中IL-1β、IL-4、IL-10、IFN-y均不同程度升高,表明Mccp感染引起机体炎症反应;细胞增殖实验发现活的或灭活的Mccp刺激PBMC均能引起细胞增殖;使用流式细胞术检测Mccp感染对PBMC细胞凋亡的影响,发现Mccp活菌和灭活菌均可引起引PBMC细胞凋亡,差异显著(p<0.001)但不同山羊个体存在较大差异。T细胞亚群的结果表明无论是感染前后和使用Mccp刺激大部分山羊的CD4+、CD8+含量高于对照组,CD4+/CD8+的比值感染后低于感染前(p<0.001),表明感染后机体以辅助性T细胞为主导,提示Mccp感染后引起较强的体液免疫和细胞免疫。
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