论文部分内容阅读
目的:通过体外细胞实验研究吗啡、舒芬太尼、布托啡诺等不同类型阿片类药物对人肺腺癌细胞株A549增殖、侵袭、迁移能力的影响,从而为肺癌治疗过程中阿片类药物的使用提供理论依据。方法:(1)蛋白免疫印迹法(Western blot)检测人肺癌细胞NCI-H358细胞株、人肺癌细胞NCI-H1975细胞株、人肺癌细胞A549细胞株等肺癌癌细胞中μ型阿片肽受体(MOR)和κ型阿片肽受体(KOR)表达情况。(2)分别用不同浓度的吗啡(0.1μmol/L、1μmol/L、10μmol/L)、舒芬太尼(0.1nmol/L、1nmol/L、10nmol/L)和布托啡诺(0.1μmol/L、1μmol/L、10μmol/L)作用于A549细胞24h,MTT法检测上述阿片类药物对A549细胞增殖的影响。(3)分别用不同浓度的吗啡(0.1μmol/L、1μmol/L、10μmol/L)、舒芬太尼(0.1nmol/L、1nmol/L、10nmol/L)和布托啡诺(0.1μmol/L、1μmol/L、10μmol/L)作用于A549细胞一周后进行克隆形成实验,检测上述阿片类药物对A549细胞增殖的影响。(4)将A549细胞接种在铺了可溶性基底膜基质Matrigel的小室中,并分别用不同浓度的吗啡(0.1μmol/L、1μmol/L、10μmol/L)、舒芬太尼(0.1nmol/L、1nmol/L、10nmol/L)和布托啡诺(0.1μmol/L、1μmol/L、10μmol/L)处理24h后进行transwell实验,从而检测上述阿片类药物对A549细胞侵袭能力的影响。同时分别用μ受体的特异性拮抗剂甲基纳曲酮和κ受体特异性拮抗剂Nor-BNI处理,从而证明以上数据的真实性。(5)分别用不同浓度的吗啡(0.1μmol/L、1μmol/L、10μmol/L)、舒芬太尼(0.1nmol/L、1nmol/L、10nmol/L)和布托啡诺(0.1μmol/L、1μmol/L、10μmol/L)作用于A549细胞24h后,细胞划痕法检测上述阿片类药物对A549细胞迁移能力的影响。同时分别用拮抗剂甲基纳曲酮和Nor-BNI处理,从而证明以上数据的真实性。结果:(1)三种细胞中,A549细胞同时表达μ型阿片肽受体(MOR)和κ型阿片肽受体(KOR)受体。(2)MTT检测结果显示,浓度为10μmol/L时,吗啡抑制A549的增殖;而舒芬太尼和布托啡诺不影响A549的增殖。(3)细胞克隆形成实验结果显示,浓度为10μmol/L时,吗啡减少A549细胞集落数目;而舒芬太尼和布托啡诺不影响A549的集落数。(4)transwell实验结果显示,吗啡在浓度为0.1μmol/L、1μmol/L时,A549细胞侵袭数目增加,但浓度为10μmol/L A549细胞侵袭数目减少;随着舒芬太尼浓度的增加,A549细胞侵袭数目增加;随着布托啡诺浓度的增加,A549细胞侵袭数目减少。加入相应的拮抗剂后,上述阿片类药物对A549细胞侵袭能力的影响会被消除。(5)细胞划痕实验结果显示,吗啡浓度为0.1μmol/L时A549细胞迁移速率增快,但当吗啡浓度增加至10μmol/L时A549细胞迁移速率明显降低;随着舒芬太尼浓度的增加,A549细胞迁移速度加快;随着布托啡诺浓度的增加,A549细胞迁移数目减少。加入相应的拮抗剂后,上述阿片类药物对A549细胞侵袭能力的影响会被消除。结论:(1)μ受体激动剂吗啡浓度为10μmol/L时抑制A549细胞增殖、迁移;吗啡浓度为0.1μmol/L时促进A549细胞迁移。(2)μ受体激动剂舒芬太尼对A549细胞增殖无影响,促进其迁移。(3)κ受体激动剂布托啡诺对A549细胞增殖无影响,抑制其迁移。