淋巴管系统和血管系统是高等动物体液循环的两大管道系统,它们共同承担着机体组织养分输入和代谢废物运出、免疫细胞和抗体、激素等生物活性分子的运输的重要功能。通过淋巴导管液回流到颈静脉的联系,两大管系协调运行,维持机体体液平衡。血管和淋巴管发育生长异常是临床医学中极为棘手的问题。神经导向因子Netrin及其受体UNC5B已被证实具有调控血管导向生长的重要作用。对于UNC5家族受体蛋白中其他成员在循环的管道系统生长发育中的作用,目前尚未报道。在本实验室的前期研究中,我们首次发现UNC5C同样在血管系统发育中发挥调控作用。同时我们发现,相对于UNC5B的倾向在动脉管,UNC5C则主要在静脉管的发育中调节发挥作用。淋巴管系统的发育主要起源于静脉,因此我们推测UNC5C也可能在淋巴管系的发育中发挥调节作用。在本研究中,我们以斑马鱼模型,研究了 UNC5C对斑马鱼淋巴管发育中的作用,并通过人淋巴管内皮细胞HLEC体外实验,研究其对淋巴形成过程的影响。我们利用CRISPR-CAS9技术搭建了斑马鱼基因敲除平台,经过筛选与鉴定,最终得到了 UNC5C纯合子敲除斑马鱼系;构建了 UNC5C干扰以及过表达的人淋巴管内皮细胞系。通过斑马鱼的体内和淋巴管内皮细胞的体外实验研究,我们取得以下发现:1.在斑马鱼体内敲除UNC5C导致其体节间淋巴管发育缺失,胸导管发育不完整,表明UNC5C在维持淋巴管正常发育中发挥重要作用。2.敲低UNC5C抑制人淋巴管内皮细胞HLEC的迁移和体外成管能力,初步揭示了 UNC5C的表达影响淋巴管的生成的细胞机制。3.UNC5C的下调,伴随有与淋巴管的发育关联的多种基因表达的显著下调,包括转录因子PROXl,生长因子VEGFC及其主要受体VEGFR3(FLT4)和NRP2,提示UNC5C可能直接或间接地参与了 LEC特化的关键转录因子和淋巴管发育的主要信号轴的转录激活。4.在人淋巴管内皮细胞中,UNC5C和UNC5B的表达存在某种互补关系,因而UNC5受体家族很可能在血管和淋巴管系的整体发育的协调中发挥作用。因此,本研究为进一步探究神经导向分子系统在循环管道系统生长发育的中调控作用提供了新的理论与数据依据。