【摘 要】
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猪流行性腹泻(PED)是由猪流行性腹泻病毒(PEDV)引起的一种猪的急性、高度接触性肠道传染病,主要特征为腹泻、呕吐、脱水和高死亡率。自2010年以来,以PEDV变异株为主引起的PED在
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猪流行性腹泻(PED)是由猪流行性腹泻病毒(PEDV)引起的一种猪的急性、高度接触性肠道传染病,主要特征为腹泻、呕吐、脱水和高死亡率。自2010年以来,以PEDV变异株为主引起的PED在我国各省份广泛流行,对我国养猪业造成了严重的经济损失。疫苗免疫是目前防控PED的最有效途径,目前市场主要预防PED的疫苗为多联灭活、或弱毒疫苗,以上疫苗存在保护率低、安全性低、成本昂贵等缺点,未对PED实现有限地防控和净化,市场亟待开发更加安全、经济、高效的新型疫苗(尤其是亚单位疫苗)用于PED的防制。PEDV S1结构域是介导PED保护性免疫的主要功能区,核心中和表位(COE)是S1的最重要功能区,也是目前用于PED亚单位疫苗研究的最小保护抗原。 因此,本研究通过毕赤酵母表达系统对PEDV S1的COE进行表达。同时尝试将COE与人和猪的IgG1 Fc进行融合来提高COE抗原的免疫效果,取得的主要结果如下: a)利用PCR分别扩增出COE、P1Fc、H1Fc片段,通过重叠PCR技术拼接COE-P1Fc和COE-H1Fc片段,成功构建了酵母表达载体pPICZαA-COE、pPICZαA-COE-P1Fc和pPICZαA-COE-H1Fc; b)利用酵母表达系统分泌表达产物经Western blotting鉴定,结果表明成功的表达了rCOE、rCOE-P1Fc、rCOE-H1Fc3种蛋白。 c)免疫小鼠42 d后采集各组血清通过间接ELASA和中和试验评价机体产生抗体情况。间接ELASA结果表明3组实验组都产生了较高水平的抗体。血清中和试验结果显示rCOE、r COE-P1Fc、rCOE-H1Fc实验组中和效价依次为1∶160、1∶640、1∶512,rCOE-P1Fc、rCOE-H1Fc实验组中和效价显著高于rCOE实验组和PBS对照组,结果表明在COE基因基础上融合佐剂P1Fc、H1Fc,明显提高了PED亚单位疫苗效果。 本研究首次利用毕赤酵母表达系统表达S1蛋白核心中和表位融合蛋白,对研究PED亚单位疫苗进行首次尝试,且IgG1 Fc片段具有佐剂功能,能提高机体免疫力,成为防控PED的新型亚单位疫苗。
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