目的对人骨肉瘤细胞系与人正常成骨细胞系的总蛋白质进行比较蛋白质组学的研究。方法通过对人骨肉瘤细胞系MG-63与人正常成骨细胞系hFOB1.19的体外培养后提取总蛋白进行双向电泳，筛选两者差异蛋白质，利用基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI-TOF/TOF MS)鉴定相关蛋白质，再利用经典分子生物学方法(western-blot)进行体内验证，检测波形蛋白在人骨肉瘤组织中的表达量。结果1.二维凝胶电泳分离显示两组间差异存在2倍及以上的蛋白点有73个，其中上调的蛋白点有50个，下调的差异蛋白点有23个，选择其中差异较显著的12个点行MALDI-TOF/TOF MS质谱分析，共检测出8种蛋白，其中通过质谱分析的结果和生物信息学的分析波形蛋白可能为骨肉瘤发生发展的蛋白结点，并用分子生物学方法western-blot给予体内验证。2.体外培养细胞系与人体组织存在差异性，因此由体外细胞系分离得出的蛋白质组学的结果需要在人体内组织标本中进行验证。对骨肉瘤组织和癌旁组织进行western-blot体内验证，分析波形蛋白在骨肉瘤组织组(n=7)和癌旁组织对照组(n=7)中的表达，采用两样本t检验进行统计学分析，骨肉瘤标本中波形蛋白的表达强度显著高于对照组。结论本课题尝试利用双向电泳技术、基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱鉴定技术相结合的方法研究人类骨肉瘤细胞系与正常成骨细胞系蛋白质组之间的差异，并对差异蛋白波形蛋白进行了western-blot体内验证，得出结论如下：1.经双向电泳技术及基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱鉴定技术的联合应用可实现人类骨肉瘤细胞系与人正常成骨细胞系差异蛋白质的鉴定，这些蛋白质可能参与了细胞内外物质交换、细胞识别、代谢调节、免疫应答等重要生物学活动。2.对差异蛋白波形蛋白进行western-blot体内验证，得到了与基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱分析一致的结果，说明了我们对人骨肉瘤细胞系与人正常成骨细胞系的比较蛋白质组学的研究结果可信，波形蛋白在人骨肉瘤标本和癌旁组织中的表达存在差异性，骨肉瘤中的表达高于对照组，可能会成为骨肉瘤早期诊断标志物或治疗靶点的基石。