论文部分内容阅读
目的：研究尿素通道蛋白B（Urea transporter B UT-B）基因敲除对小鼠自主行为的影响；以及小鼠海马形态结构的改变，海马组织内尿素和NO含量、MKP-1表达部位及水平的改变，以及MAPK信号分子的表达水平变化，探讨UT-B基因敲除小鼠出现抑郁样行为的分子机制。方法：1.8-12周龄体重匹配，雌性野生型和UT-B基因敲除小鼠各20只，分别进行强迫游泳实验，高架十字迷宫实验和旷场实验，检测野生型小鼠和UT-B基因敲除小鼠的自主行为。2.采用HE染色和免疫组织化学技术，观察两型小鼠海马形态结构以及MKP-1的表达。3.采用尿素和NO检测试剂盒测定两型小鼠海马尿素和NO水平。4.采用Western Blot技术检测两型海马MKP-1、MAPKs相关信号分子的表达水平。结果：1．强迫游泳实验结果显示：野生型小鼠和UT-B基因敲除小鼠的游泳不动时间分别为（86±13s）和（123±19s），UT-B基因敲除小鼠的游泳不动时间明显延长（P=0.0012<0.05）。2．高架十字迷宮实验结果显示：野生型小鼠和UT-B基因敲除小鼠开臂停滞时间分别为（74.79±13.70）s和（12.71±3.170）s（P=0.0109<0.05）；进入开臂次数分别为（12.50±1.645）和（4.75±0.56）（P=0.0021<0.05）；进入开臂次数与总入臂次数百分比分别为（58.63±4.28）%和（27.25±3.29）%（P=0.0009<0.05）；开臂停滞时间与总时间百分比分别为（31.61±6.71）%和（7.69±2.30）%（P=0.0426<0.05）。3．旷场实验结果显示：野生型小鼠和UT-B基因敲除小鼠在中央区域活动时间分别为（32.08±7.96）s和（13.50±2.96）s（P=0.025<0.05）；中央区域活动路程分别为（873.5±137.1）mm和（594.8±190.8）mm（P=0.778>0.05）；总路程分别为（10110±756.3）mm和（13770±844.7）mm（P=0.025<0.05），UT-B基因敲除小鼠在中央区域活动时间明显减少，运动频率高。提示其具有抑郁样行为。4．UT-B基因敲除小鼠海马各亚区神经元密度减小，神经元MKP-1的表达水平上调。5．UT-B基因敲除和野生型小鼠海马尿素水平为（16.7±2.0mM vs11.6±1.4mM，p=0.004<0.001），NO含量为（1.05±0.07μmol/gprot vs1.29±0.06μmol/gprot，p=0.04<0.05），表明UT-B基因敲除小鼠海马尿素水平显著升高而NO含量明显降低。6．UT-B基因敲除小鼠海马MKP-1表达水平上调531.9%，pERK和pJNK表达水平明显降低39.1%和21.3%，磷酸化p38MAPK水平无明显改变。结论：1．强迫游泳实验、高架十字迷宫实验和旷场实验结果提示UT-B基因敲除小鼠具有抑郁样行为。2．UT-B基因敲除引起小鼠海马神经元减少，尿素堆积，NO含量减少。3．UT-B基因敲除引起小鼠海马缺氧，诱导神经元MKP-1表达水平上调，MKP-1通过特异性下调pERK和pJNK水平引发小鼠的抑郁样行为。