通用型病毒灭活血浆制备方法研究

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目的为平战时大批量应用血浆救治患者和伤员赢得时间,研究通用血浆的混合比例及病毒灭活条件,降低血浆中抗血型抗体IgM的效价及灭活经输血传播的相关病毒。方法1.先将A型血浆与B型血浆1:1混合,根据抗体效价变化趋势确定比例方向及最佳比例。用同样的方法确定A型血浆与AB型血浆和B型血浆与AB型血浆的最佳比例。2.用正交设计分析不同血型的血浆比例(根据1中得出的结果)、反应温度(4℃、22℃、37℃)和反应时间(1h、3h、5h)三种因素对混合后血浆中抗血型抗体效价的影响,确定最佳生产方案。对最佳生产方案进行验证。3.病毒灭活条件的研究选择HBV的模拟病毒PRV为指示病毒,病毒培养及毒力测定用其敏感细胞PK-15,病毒滴度用TCID50表示。选择核黄素结合紫外线照射的光化学法灭活病毒,通过研究紫外线波长、核黄素浓度、核黄素与病毒作用时间对病毒灭活效果的影响,初步确定病毒灭活的方案。4.病毒灭活过程对血浆质量的影响根据病毒灭活效果,选择能够灭活4lgTCID50/0.1ml PRV的照射时间,测定处理前后血浆中VIII因子和AT-III活性及Fg浓度的变化,观察病毒灭活过程对血浆质量的影响。结果1.A型血浆与B型血浆、A型血浆与AB型血浆、B型血浆与AB型血浆的最佳混合比例分别是3:1、1:2、1:3。2.经正交设计得出的最佳生产条件为A:B:AB=6:2.5:1.5,反应时间1h,反应温度22℃,进行三次验证试验,抗AIgM和抗BIgM的效价均≤1:2。3.核黄素光化学法灭活病毒的紫外线有效波长为365nm+308nm,核黄素浓度为60μmol/L,核黄素与病毒作用时间为10min。照射20min时可灭活约4lgTCID50/0.1ml的PRV。4.紫外线照射20min时,血浆中VIII因子、Fg和AT-III损伤较多,需重复测定或调整病毒灭活方案。结论1.通用型血浆制备时各血型血浆的最佳比例是A:B:AB=6:2.5:1.5,抗血型抗体IgM的效价≤1:2低于国外现有的两种通用型血浆的抗体效价,为国内生产通用血浆提供了实验依据。2.核黄素光化学病毒灭活法在20min内能够有效地灭活脂包膜病毒PRV,病毒灭活动力学显示其灭活速率先快后慢,符合《血液制品去除/灭活病毒技术方法及验证指导原则》。
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