目的在该研究中,研究Toll样受体激动剂作为佐剂对DC负载白血病干/祖细胞的影响,用TLR3激动剂(poly I:C)联合TLR9激动剂(Cp G ODN)来刺激负载CD34+白血病细胞的DC,了解TLR激动剂对负载CD34+白血病细胞的DC的细胞形态及免疫表型的影响,为研究DC的功能、进一步探索体外白血病细胞免疫原性的增强提供依据,为白血病细胞的体内免疫清除的可能性提供理论依据。方法与患者或患者授权人签署知情同意书后,临床收集急性髓细胞白血病初发患者(不包括M3,根据FAB分型)新鲜骨髓抗凝血3-5ml,经密度梯度离心法分离获得外周血单个核细胞,采用免疫磁珠法分选出CD34+细胞后冻存留作后续实验;再次收集急性髓细胞白血病患者自体缓解期新鲜外周抗凝血,经密度梯度离心法与免疫磁珠分选法分离获得CD14+PBMC,加入粒细胞集落刺激因子(GMCSF)、白介素(IL)-4,肿瘤坏死因子(TNF-α),体外培养获得DC,然后将DC与药物凋亡的CD34+白血病细胞融合培养2h,再使用Toll样受体(TLR)激动剂的不同组合(TLR-3激动剂联合TLR-9激动剂)来进一步成熟DC以获得功能性DC,观察其细胞形态和免疫表型特征。结果(1)在倒置显微镜下,成熟DC细胞体积变大,半悬浮,形状不规则,多个毛刺状突起于表面,具有成熟DC的典型形态特征;(2)流式检测细胞表面CD11c表达明显增加,CD14表达下调,表明DC的转化生成;(3)TLR3激动剂(poly I:C)联合TLR9激动剂(Cp G DNA)诱导负载LSC的DC的成熟,其表面CD11c、CD86阳性表达较单药组及空白对照组明显升高,联合刺激组能进一步使DC成熟,从而使其抗肿瘤效应得到增强。结论(1)TLR3激动剂(poly I:C)联合TLR9激动剂(Cp G ODN)可促进DC进一步成熟,增强DC刺激CTL细胞的活化,从而发挥抗肿瘤免疫效应。(2)本研究制备的DC肿瘤疫苗能有效摄取、提呈抗原并诱导出具有肿瘤特异性的CTL,产生高效且特异的抗肿瘤效应,并具有潜在的临床应用前景。