论文部分内容阅读
海带是一种常见的经济海藻,常作为医药工业原料。岩藻聚糖是海带中特有的生物活性组分,具有显著的抗病毒、降血脂、抗肿瘤等多种生理活性,是本世纪天然产物开发研究的热点之一。为合理利用南方海带资源,本课题以福建泉港海带为原料,采用热水提取制得岩藻聚糖,并对其进一步纯化,获得高纯度不同岩藻聚糖组分。对各个岩藻聚糖组分进行初步的结构分析,并研究其生理活性,得到结果如下:1.为了提高Dische比色法分析效率,实验对其进行改进,考察了不同反应条件对显色稳定性的影响,并进行方法学验证。实验表明,改进的Dische比色法在40 min时达到显色稳定状态,方法的精密度、重复性、稳定性及加标回收率均符合相关标准。2.实验比较了水提法及酸提法对岩藻聚糖提取率及SO42-含量的影响。最终确立水提法制备海带岩藻聚糖,确定最佳提取工艺条件为:提取时间3 h,提取温度70℃,料液比1:30。在此条件下,岩藻聚糖的提取率达2.15%。实验对岩藻聚糖粗品的理化性质分析表明其总糖含量为35.83%,L-岩藻糖含量为16.66%,蛋白质含量为4.39%,SO42-含量为16.06%。3.实验采用乙醇重沉淀法对岩藻聚糖粗品进行初级纯化,经DEAE-52纤维素阴离子交换层析和Sephadex G-200凝胶过滤层析得到五个单一洗脱峰SF2-1,SF3-1,SF4-1,SF5-1及SF6-1。高效液相色谱法测定得到的五种岩藻聚糖组分的分子质量分别为108.7 kDa、92.3 kDa、183.5 kDa、137.4 kDa、106.1 kDa。4.不同岩藻聚糖组分的结构分析:实验采用PMP衍生化对不同岩藻聚糖组分进行分析,其中不同岩藻聚糖组分的单糖组成及比例各不相同。通过FTIR分析,表明岩藻聚糖在3450-3300 cm-1呈现糖类的特征吸收峰;在2935 cm-1附近呈现岩藻糖中-CH3的吸收峰;1250 cm-1为S=O的伸缩振动峰,证明不同岩藻聚糖均含有SO42-基团。实验通过1H NMR分析其结构,其中δH 5.09-5.39 ppm的峰为异头质子的信号峰,说明各岩藻聚糖组分均含有α型硫酸岩藻糖。13C NMR谱图进一步分析了岩藻聚糖的糖主链,结果表明各岩藻聚糖组分中均含有L-岩藻糖。5.实验考察了不同岩藻聚糖对HeLa细胞及HepG2细胞增殖的抑制作用,结果表明4个组分对两种肿瘤细胞的增殖均具有较高的抑制作用,且呈量效和时效关系。通过考察不同岩藻聚糖组分对油酸诱导的HepG2细胞内TG含量的影响,实验发现,岩藻聚糖可降低HepG2细胞内甘油三酯（TG）的含量,且呈量效关系。综上所述,本文对Dische法进行了改进,其分析速度得到显著的提高。并对岩藻聚糖的提取方法及提取条件进行了考察,确定最佳的工艺路线。进一步分离纯化制得高纯度岩藻聚糖,并对其抑制肿瘤细胞增殖及改善油酸诱导的HepG2细胞内TG含量的抑制作用进行了研究,旨在为合理开发利用海带资源奠定基础,也为福建海带的进一步开发利用和产业的健康发展提供科学依据。