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坛紫菜是我国沿海地区人工栽培的主要经济海藻品种之一,具有抗氧化、抗肿瘤和免疫调节等诸多功效,坛紫菜的收获具有“分茬采割”的特点,而坛紫菜多糖作为决定坛紫菜发挥各功能活性的主要成分,随着收获期的延后其化学结构及生物活性会不断发生变化。现有研究对不同收获期坛紫菜多糖的化学结构和功能活性的关系尚不明确。近年来,多种食源性海藻多糖已被发现存在优良的抗过敏活性,因此从不同收获期坛紫菜多糖中筛选出对食物过敏的缓解作用较强的特征多糖,并解析其活性机制,是对食物过敏防治的一个重要补充。为确定不同收获期坛紫菜多糖缓解食品过敏的活性差异。本研究对3种不同收获期坛紫菜粗多糖进行两次分离纯化,获得了9种均一的精细组分。以肠道上皮细胞、树突状细胞及小鼠T细胞为体外细胞基础,通过Transwell小室进行共培养,构建模拟肠道粘膜免疫环境的三维细胞模型。使用致敏原OVA引起三维细胞模型和Balb/c小鼠模型产生致敏反应,以不同多糖进行干预,检测过敏相关基因表达和T细胞分化等过敏关键指标,以此筛选出缓解食物过敏活性差异的特征多糖组分,并探究坛紫菜多糖对缓解OVA介导致敏的机制。进一步对特征多糖进行精细结构解析,探究出不同收获期坛紫菜多糖缓解食物过敏活性与其化学结构的关联。本文主要研究结果如下:1.从不同收获期的坛紫菜中提取了3种粗多糖CPHP1、CPHP2和CPHP3,先后使用纤维素DE-52层析柱和Sephadex G-100层析柱,进行两次分离纯化,依次得到了9种不同收获期坛紫菜多糖精细组分PHP1-1、PHP1-2、PHP1-3、PHP2-1、PHP2-2、PHP2-3、PHP3-1、PHP3-2和PHP3-3。理化性质分析显示CPHP3的电负性、精细组分产率和硫酸根含量与CPHP2和CPHP3有显著差异。2.以12种坛紫菜多糖干预肠道三维细胞过敏模型,通过RT-q PCR及流式细胞术分析,发现各收获期粗多糖分离纯化出的第三组分,显著降低了因OVA刺激升高的促过敏免疫因子TSLP、IL-33、OX40L、IL-6、GATA-3、IL-4和INF-γ基因表达,其中,PHP3-3显著抑制了OVA诱导Th0细胞向Th2和Th1细胞的分化。多糖精细组分缓解过敏能力按分离纯化出峰顺序依次增强,筛选出最强、较强和最弱的特征多糖组分为PHP3-3、PHP2-3和PHP1-1。3.以3种粗多糖干预OVA致敏Balb/c小鼠后,发现小鼠过敏症状表现降低,血清中OVA特异性Ig E、组胺和IL-4含量显著降低,Ig G2a和INF-γ含量升高。脾脏、大肠及小肠中受OVA刺激升高的促过敏因子IL-33、IL-6、IL-4和GATA-3基因表达量下降。其中,CPHP3显著抑制了过敏相关基因的表达,显著抑制了OVA刺激小鼠脾脏中Th0细胞向Th2细胞的分化,减轻了肠道损伤,缓解了小鼠体内OVA介导的过敏反应。确定了粗多糖缓解OVA介导的过敏能力CPHP1＜CPHP2＜CPHP3。4.理化表征分析发现,坛紫菜多糖主要由半乳糖和β型3,6-内醚半乳糖构成。分离纯化后精细多糖组分的糖醛酸含量降低,PHP2-3和PHP3-3均含α型糖苷和β型糖苷,PHP1-1只含α型糖苷。特征多糖PHP1-1、PHP2-3和PHP3-3的分子量分别为13.73、366.87和609.85 k Da。硫酸根含量PHP1-1＜PHP2-3＜PHP3-3,4-O-连接6-硫酸基α-L-半乳糖含量PHP1-1＜PHP2-3＜PHP3-3,3,6-内醚-α-L-半乳糖含量PHP1-1＞PHP2-3＞PHP3-3,糖苷键种类数量PHP1-1＞PHP2-3＞PHP3-3。5.坛紫菜多糖缓解食品过敏活性与硫酸根含量、分子量和4-O-连接6-硫酸基α-L-半乳糖含量正相关,与葡萄糖醛酸含量、3,6-内醚-α-L-半乳糖含量和糖苷键种类数量负相关,提示这些基团和组成与多糖抗过敏活性有关。