克伦特罗快速检测方法的研究

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克伦特罗是β肾上腺素的一种,临床用来治疗哮喘等呼吸系统疾病,由于可以促进动物脂肪的重分配,提高动物瘦肉率,近年来被作为“瘦肉精”非法添加到动物饲料中,严重危害了消费者的身体健康,打击消费者的信心。国内外关于克伦特罗检测方法的报道已经有很多,如高效液相色谱法、高效气相色谱-质谱联用法、酶联免疫法、金标试纸法、生物传感器法等。这些方法存在着各样的缺点,均不能同时满足企业批量、现场、快速检测克伦特罗的的要求,针对以上问题,本文以血清中的克伦特罗为对象,研究了一种利用碱性高锰酸钾检测克伦特罗的新方法。本文选择了邻甲氧基苯酚、甲萘酚、茜素、N-(1-萘基)-乙二胺、高锰酸钾五种显色剂检测克伦特罗,每种显色剂的最佳反应条件分别如下。邻甲氧基苯酚检测克伦特罗的最佳反应条件:KHSO4浓度为0.36mol/L,NaNO2浓度为0.72mol/L,H2NSO3NH4浓度为0.11mol/L,体积比为0.6:0.2:1,检出限为5.4μg/mL;甲萘酚检测克伦特罗的最佳反应条件:NaNO2浓度为0.10mol/L,HCL浓度为1.50mol/L,H2NSO3NH4浓度为0.15mol/L,体积比为1:1:1,检出限为4.0μg/mL;茜素检测克伦特罗的最佳反应条件:茜素浓度为5.0×10-4mol/L-,乙酸浓度为1.0×105mol/L,体积比为1:1,检出限为4.0μg/mL;N-(1-萘基)-乙二胺检测克伦特罗的最佳反应条件:HCL浓度为0.2mol/L,NaNO2浓度为0.1mol/L,H2NSO3NH4浓度为0.3mol/L,体积比为1:1:1,检出限为1.2μg/mL;碱性高锰酸钾检测克伦特罗的最佳反应条件:NaOH浓度为1.5mol/L,KMnO4浓度为5.0×10-4g/mL,NaOH:KMnO4体积比为10:1,检出限为1.0ng/mL。选择碱性高锰酸钾显色剂检测血清中的克伦特罗,通过正交试验设计和二次通用旋转分析,确定了最佳反应条件,即NaOH浓度为0.468mol/L,KMnO4浓度为0.327×10-3g/mL,NaOH:KMnO4(V1:V2)=0.159;在此反应条件下以血清中克伦特罗的浓度(ppb)为横坐标,反应吸光度值为纵坐标,绘制标准曲线方程如下:y=0.6614-0.1057x2(R=0.9973);确定了此方法的检出限为1ppb;对盐酸肾上腺素、莱克多巴胺和沙丁胺醇有着良好的特异性;此方法的批内变异系数在2.10%-16.67%之间波动,批间误差在0.71%-7.44%之间波动,重现性良好;通过碱性高锰酸钾比色法与酶联免疫反应(ELISA)标准点和实际样品测定比对试验,发现前者的标准点拟合误差和实际样品回收率测定误差均低于后者,因此碱性高锰酸钾法的稳定性优于ELISA法。依据碱性高锰酸钾与克伦特罗反应的原理,以耐碱PVC板材为载体制做快速检测试纸条,检出限为1ppb;试验表明4℃下速测试纸条的稳定期为三个月,25℃下稳定期为两个月;盐酸肾上腺素、莱克多巴胺和沙丁胺醇浓度高达100ng/mL时,快速检测试纸条仍无法将其检出,试验证明试纸条稳定性和特异性均良好。本文通过一系列试验研究,确定了碱性高锰酸钾检测血清中克伦特罗的最佳条件,验证了方法的特异性与重现性,并根据此反应研制了克伦特罗速测试纸条。证明了碱性高锰酸钾检测克伦特罗是一种快速、灵敏、便捷、价廉的检测方法,为克伦特罗的快速、现场检测提供了理论依据。
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