准东油田石油降解菌筛选及高效菌株降解和修复特性研究

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新疆蕴藏着丰富的油气资源,多年的开采过程中大量石油污染物排放到土壤环境当中,对脆弱生态环境造成巨大危害。微生物修复技术在石油污染土壤的应用中已经取得很多实际效果,但仍存在待解决的问题。石油降解菌是否会适应野外环境,是否会在降解过程中与土著微生物竞争失去优势地位。基于存在的问题,本文以准东油田陆梁、火烧山、彩南、吉祥和沙南五个采油区的石油污染土壤为材料,液体富集培养筛选分离石油降解菌,通过16S r RNA测序对石油降解菌进行鉴定。再通过液体摇瓶降解实验鉴定出高效石油降解菌,其中陆梁采油区的CY2-1菌株对石油降解能力强且能分泌表面活性剂。针对该菌株采用气相色谱-质谱联用法(GC-MS)鉴定菌株降解底物谱,同时对石油降解菌全基因组和转录组测序及分析,研究石油降解菌代谢潜能及降解石油过程中上调和下调基因功能,分析与石油有机污染物降解相关基因及代谢通路。(1)从新疆准东油田五个采油区分离获得石油降解优势菌24株。经16S r RNA鉴定菌株属于变形菌门、厚壁菌门和放线菌门3个门;寡养单胞菌属、葡萄球菌属、链霉菌属、红球菌属、无色杆菌属、泛菌属和假单胞菌7个属,绝大多数来源于假单胞菌属。经液体摇瓶降解实验,鉴定CY2-1菌株为高效石油降解菌,并能产表面活性剂,液体摇瓶33mg石油4天降解率可达到96.69%。(2)针对CY-2菌株进行液体摇瓶降解实验,并进行GC-MS检测。结果显示经过降解菌降解石油样本相对对照样本总离子流色谱图中色谱峰明显产生变化,原油中大分子量烷烃被降解生成小分子量烷烃。质谱鉴定结果显示,对照样本中有47种组分,经降解菌降解后,仅检测出19种组分,降解菌对不同烷烃组分产生降解作用并代谢为H2O和CO2。降解组分中正二十烷相对丰度较高,推测降解菌对该物质降解效率低。(3)针对CY2-1菌株进行全基因组和转录组测序分析,该菌基因组大小为6256232bp,GC含量为66.58%,基因长度占基因组长的比例为89.44%,注释获得5861个基因,513非编码RNA。在转录组测序结果表明高表达基因多在同一基因簇中,与正构烷烃降解相关cytochrome P450、integral-membrane alkane monooxygenase(Alk B)和short-chain dehydrogenase等基因高表达。(4)室内模拟降解实验中,CY2-1菌株对含油率2%的沙土进行15天降解,土壤含水率从23%降到2.5%,含油率降解为0.8%,大部分正构烷烃含量下降,正十六烷和正二十一烷降解速率较慢。
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