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目的:探讨烟酰胺单核苷酸(NMN)抵抗D-半乳糖诱导的HT22细胞衰老的作用效果及分子机制。方法:首先,用不同浓度梯度(10 mM、50 mM、100 mM)的D-半乳糖对HT22细胞进行衰老造模。为确定衰老细胞的最佳时间和浓度,由MTT法检测细胞的活性,绘制出细胞生长曲线,由β-半乳糖苷酶染色法(Senescence Associated acidic-β-Galactosidase,SA-β-Gal)检测细胞衰老程度;通过蛋白免疫印迹法(Western Blot,WB)检测细胞衰老相关蛋白表达和实时荧光定量PCR法(RT-PCR)检测细胞衰老相关基因表达以评价HT22细胞衰老程度。然后,用200μM的NMN给药的方式对衰老HT22细胞模型进行挽救,同样通过MTT、SA-β-Gal、WB和RT-PCR评价挽救效果。接着,初步探究NMN抵抗D-半乳糖诱导的HT22细胞衰老的具体机制,检测NAD~+的基因表达、总抗氧化能力、SOD酶活性和线粒体膜电位以及沉默信息调节因子3(Silent mating type information regulator3,SIRT3)表达。最后,在衰老细胞模型中用SIRT3抑制剂20μM的3-TYP和NMN组合给药,再次通过MTT、SA-β-Gal、WB等方法评价SIRT3在细胞衰老和逆转过程中的作用。结果:1、成功地建立了由D-半乳糖所诱导的HT22细胞衰老模型;2、烟酰胺单核苷酸对D-半乳糖诱导HT22细胞衰老模型起到抵抗作用;3、烟酰胺单核苷酸通过NAD~+代谢通路中上调SIRT3抵抗D-半乳糖所诱导的HT22细胞衰老。结论:烟酰胺单核苷酸通过NAD~+代谢通路上调SIRT3抵抗D-半乳糖诱导的HT22细胞衰老。