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目的:探索成年雌鼠骨髓干细胞(female bone marrow stem cells, FBMSCs)离体培养条件下是否表达多能干细胞和原始生殖细胞表达的基因Oct4、原始生殖细胞开始分化至减数分裂后期产生配子的生殖细胞特异表达的标志基因Vasa、以前研究认为仅在雌性胚胎生殖干细胞由有丝分裂转变为减数分裂前表达的标志基因Stra8及减数分裂标志基因Scp3,判断FBMSCs是否有向卵母细胞样细胞分化的能力。方法:全骨髓贴壁法分离青年雌性SD大鼠FBMSCs,传代培养第三代FBMSCs用DMEM+15%胎牛血清培养,全反式维甲酸(all-trans retinoic acid, ATRA)组加入终浓度为10-5 Mol/L的ATRA;RT-PCR方法检测FBMSCs的Oct4、Vasa、Stra8及Scp3 mRNA的表达;Oct4和Stra8基因PCR扩增产物用DNA测序法双向测定cDNA序列;用免疫细胞化学方法检测FBMSCs的SCP3蛋白的表达。结果:1.ATRA组部分FBMSCs分化成为大小不一、呈圆形或球形的细胞,分化的大而圆形细胞周围有数个小细胞环绕,对照组FBMSCs细胞比较均一呈长梭形。2.对照组和ATRA组连续培养8天都可检测到早期生殖干细胞标志基因Oct4、Vasa mRNA及生殖干细胞减数分裂启动标志基因Stra8 mRNA在诱导分化的FBMSCs中表达。并且Oct4和Stra8基因PCR扩增产物基因测序结果与基因库中序列基本一致,Oct4的序列同源性大于99%,Stra8的序列同源性为100%。3.ATRA组培养第8天开始检测到生殖细胞减数分裂标志基因Scp3 mRNA的表达,并于第15天也有表达,但对照组未检测到Scp3 mRNA表达。4.免疫细胞化学显示, ATRA组培养第10、15、29天的FBMSCs部分细胞分化成为中等大小球形或圆形的SCP3阳性细胞,呈簇状分布,随着培养时间延长,阳性细胞增多,细胞体积增大。而对照组第15天开始有少量表达,也随着培养时间延长,阳性细胞增多,细胞体积增大。结论:1.对照组和ATRA组培养8天内均可诱导FBMSCs表达早期生殖干细胞标志Oct4、Vasa mRNA及生殖干细胞由有丝分裂转变为减数分裂前特异表达基因Stra8 mRNA,表明FBMSCs中具有能向卵母细胞分化的多能干细胞,减数分裂启动标志基因Stra8不仅在雌性胚胎生殖干细胞表达,也在成年雌性骨髓中的有向生殖干细胞分化能力的细胞中表达,提示成年雌性有新的卵母细胞生成的可能。2.减数分裂期特异标志基因Scp3 mRNA只在ATRA诱导的FBMSCs中才有表达。ATRA组培养第8天开始检测到Scp3 mRNA,并于第15天也有表达,而对照组不表达Scp3 mRNA,可能与本实验培养条件有限,长期培养细胞数量明显减少造成所提取的mRNA的量不足导致检测不到有关。3.ATRA培养可诱导FBMSCs表达生殖细胞减数分裂期特异标志SCP3蛋白质,表明FBMSCs中具有能向卵母细胞减数分裂I期前期进行染色体联会可能的细胞存在。对照组在较长时间培养后也表达SCP3蛋白质,提示我们的高胎牛血清培养条件本身就可诱导FBMSCs表达Stra8 mRNA和SCP3蛋白质,具有诱导FBMSCs向卵母细胞样细胞分化的潜能。