背景:近年来,食物过敏(Food Allergy,FA)以及由食物过敏引发的相关疾病在全球范围内增加明显,从调查文献得知全球大约4%-8%的儿童和1%-2%的成年人对食物性质的抗原具有IgE介导的高反应性。由FA引发的过敏性结肠炎(Food Allergic Colitis)日趋严重。IL-25是新近发现的T_H17家族的新成员,其通过调控细胞介导的免疫反应,从而能够影响肠道炎症(Inflammatory bowel disease)的发生和发展。目的:在前期相关的研究已经表明,IL-25在肠道炎症中调控T_H1/T_H2免疫平衡进而缓解炎症反应,但是IL-25如何在由FA引起的过敏性结肠炎过程中起作用的仍未完全清楚。本研究的目的就是探究IL-25在由食物过敏引发的结肠炎发病中是如何起作用的。方法:(1)利用NCBI数据库筛选抗原卵白蛋白(Ovalbumin,OVA)的优势T细胞表位,然后将获取得到的OVA(OVA序列片段323-329)和DEC205(DEC抗体单链片段)重组成了一个融合蛋白。通过ELISA检测小鼠血清OVA IgG1验证其OVA免疫原性。在保证其具有免疫原性的前提下将该蛋白通过分子工程技术重组。在合成得到完整的融合蛋白后,确定为我们所需要的目的蛋白。再通过蛋白纯化系统获得高纯度融合蛋白以备用。(2)建立食物过敏性结肠炎的动物模型。利用OVA加霍乱毒素(Cholera toxin,CT)灌肠给药构建食物过敏性结肠炎模型,通过检测结肠部病理切片H&E染色、血清特异性抗体、细胞因子以及组织学评分等验证模型是否成功。(3)在上一步成功建立食物过敏性结肠炎模型的基础上,在小鼠每次给予OVA和CT之前,分别设置50 ug、100 ug、150ug的梯度通过灌肠给予纯化后的融合蛋白。并用等量体积的PBS作为对照。在第17天后处置小鼠,收集小鼠的血清、脾细胞及结肠等样品,通过评估不同组别的小鼠食物过敏性结肠炎情况。观察小鼠体重是否减轻、出现腹泻、毛发稀疏等炎症状况,同时对小鼠结肠发病部位进行病理学H&E切片染色观察病变是否明显。小鼠血清通过酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测结果显示IL-4,IL-10,IFN-γ,IgE,IL-25等细胞因子的变化。小鼠黏膜研磨后提取总RNA进实时PCR检测IL-25mRNA的含量。在小鼠处理后及时分离不同组别的脾细胞进行流式检测CD4~+CD25~+Treg的比例。结果:ELISA检测结果显示融合蛋白免疫原性良好,通过实验室蛋白纯化系统也成功获得高纯度的融合蛋白。我们将高纯度的融合蛋白用于小鼠食物过敏性结肠炎给药后,OVA+CT模型组小鼠均出现体重减轻,轻微腹泻,毛发稀疏等炎症生理状况,严重的小鼠时常有便血发生。H&E病理学切片显示模型组出现严重的炎症,表现为结肠部位杯状细胞被破坏,大量嗜酸性细胞侵润,而融合蛋白给药组炎症程度相对于模型组明显减轻。IL-4,IL-10,IgE等结果也同样是模型组大于融合蛋白给药组。体内及体外BMDC流式检测表明融合蛋白可诱导Treg生成,同时融合蛋白能够显著抑制抗原特异性CD4~+T细胞的增殖。模型组血清中IL25含量和结肠黏膜的IL25m RNA的含量对比正常组有所下降,在给予融合蛋白后含量增加。结论:本研究构建了pET-28a-DEC-OVA重组质粒,经过将重组质粒转导大肠杆菌中,再通过NI~+柱纯化系统得到大量DEC-OVA蛋白。在融合蛋白能够很好的靶向DC的同时可诱导Treg生成,且能够通过抑制OVA特异性T细胞增殖进而抑制过敏性结肠炎。而IL-25在食物过敏性结肠炎发病时对比正常组小鼠下降,缓解病情后回升;本研究表明了IL-25是维持肠道黏膜内环境稳定的重要因素,缺乏IL-25会导致免疫耐受功能失调和结肠炎症。