【摘 要】
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近年来,随着人们生活水平的提高,高品质牛肉越来越受到消费者的青睐。目前,如何提高牛肉的产量和质量成为亟待解决的问题。肌肉生长发育与牛肉的产量直接相关,而肌内脂肪的含量是提高牛肉品质的重要决定因素。从细胞水平上来说,成肌细胞和前体脂肪细胞的增殖分化直接影响肌肉和脂肪的生长发育,进而影响牛肉的产量;而肌细胞和脂肪细胞之间的相互作用影响着大理石花纹牛肉的形成,最终影响牛肉品质。心肌肌动蛋白α1(Acti
【基金项目】
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中央高校基本科研业务费专项资金(No.2452020156); 国家自然科学基金(No.31572363);
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近年来,随着人们生活水平的提高,高品质牛肉越来越受到消费者的青睐。目前,如何提高牛肉的产量和质量成为亟待解决的问题。肌肉生长发育与牛肉的产量直接相关,而肌内脂肪的含量是提高牛肉品质的重要决定因素。从细胞水平上来说,成肌细胞和前体脂肪细胞的增殖分化直接影响肌肉和脂肪的生长发育,进而影响牛肉的产量;而肌细胞和脂肪细胞之间的相互作用影响着大理石花纹牛肉的形成,最终影响牛肉品质。心肌肌动蛋白α1(Actin alpha cardiac muscle 1,ACTC1)是本实验室前期在牛成肌细胞和前体脂肪细胞共培养的研究中通过转录组测序技术筛选出来的差异表达基因。关于ACTC1基因对牛肉质性状的影响,以及对牛成肌细胞和前体脂肪细胞增殖分化的影响尚未见报道。因此,在本研究中以ACTC1基因为目的基因,筛选其存在的SNP位点,并分析该基因的多态性与秦川牛生长及肉质性状的关联性,初步探究ACTC1基因与肉牛生长及肉用性状的关系;进一步利用腺病毒介导的干扰、过表达以及异位表达的方法,在细胞水平上研究ACTC1基因对牛成肌细胞和前体脂肪细胞增殖分化的影响,从而进一步揭示ACTC1基因调控肉牛肌肉和脂肪组织生长发育的作用机制。所获得的试验结果及结论如下:1.利用PCR-RFLP技术对ACTC1基因第4外显子SNP位点(30363938)进行酶切分型,并与339头秦川牛的12种体尺性状进行了关联性分析,结果发现该位点多态性与肉牛的尻长、坐骨端宽以及眼肌深度显著相关(P<0.05)。2.牛ACTC1基因表达规律结果显示:ACTC1基因在成年牛和新生牛的心脏和肌肉组织中表达量最高,与其他组织相比显著差异(P<0.05);在脂肪组织中的表达量较低;除了在肾脏和瘤胃中表达差异不显著外(P>0.05),在其他成年牛各组织中的表达量均显著或极显著高于新生牛(P<0.05;P<0.01);ACTC1基因在成肌细胞诱导分化过程中的表达趋势为先升高后降低;而在前体脂肪细胞诱导分化过程中未检测到ACTC1基因的表达。3.在牛成肌细胞中干扰和过表达ACTC1基因后,均显著抑制了成肌细胞增殖,P21基因表达量均显著上升;在牛前体脂肪细胞中异位表达ACTC1基因后,细胞增殖无显著变化,P21、P27、CCNA2、CCND2等增殖标志基因的表达量无显著变化。4.在牛成肌细胞中干扰ACTC1基因后,显著抑制了肌管的形成,在m RNA和蛋白表达水平检测成肌标志基因表达量的变化,发现MYOD1、MYOG、MYH3、MRF4、以及CKM在肌管形成的中后期显著或极显著下降(P<0.05;P<0.01);MYF5在第0、4、8天显著或极显著上升(P<0.05;P<0.01),而在第6天显著上升(P<0.05);MEF2A在第0(P<0.05)和4(P<0.01)天显著下降,而在第2、6天显著上升(P<0.05)。相反,过表达ACTC1基因后,显著促进肌管的形成,尤其对细胞分化后期肌管的维持有显著作用。在牛前体脂肪细胞中异位表达ACTC1基因后,显著促进了脂滴的生成,脂生成相关因子(FABP4、PPARγ、SCD1、FASN)在m RNA和蛋白水平上显著上调。综上所述,本研究发现ACTC1基因多态性与秦川牛部分肉用性状显著相关,ACTC1基因能够促进成肌细胞和前体脂肪细胞分化,影响成肌细胞增殖。据此推测ACTC1基因可能是影响肉牛肌内脂肪生成的重要候选基因。
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